Бак анализ почвы это

Санитарно-бактериологическое исследование почвы — Н. А. Бельская

Почва является основным местом обитания многих микроорганизмов (см. главу 6). Из почвы микробы поступают в воду и обсеменяют воздух.

Микробиологическое исследование почвы имеет важное значение. Оно проводится при выборе участка для строительства детских учреждений, спортивных площадок, больниц, госпиталей, военных лагерей, водопроводных сооружений и других объектов.

Санитарно-микробиологический анализ почвы включает определение:

1) общего количества бактерий в 1 г почвы;

2) титра санитарно-показательных микроорганизмов БГКП и С. perfringens;

3) термофильных бактерий в 1 г почвы;

4) по эпидемиологическим показаниям проводится исследование на наличие патогенных микроорганизмов (сальмонелл, шигелл, клостридий столбняка, ботулизма, некоторых вирусов и др.).

Отбор проб почвы. Выбор места для отбора проб почвы определяется санитарным врачом и бактериологом в зависимости от цели и задачи исследования. На обследуемой территории до 1000 м 2 выделяют два участка площадью 25 м 2 . Один должен быть расположен близ источников загрязнения (свалки, мусорные ящики, выгребные ямы и т. д.), другой — в отдалении от них (контроль). На каждом участке в 25 м 2 намечают для отбора проб пять точек: четыре по углам и одна в центре или пять точек по диагонали участка.

Для исследования поверхностного слоя почвы пробы отбирают стерильной лопаткой или совком на глубине до 20 см. Из отдельных точек участка лопаткой выкапывают цельный кусок почвы. Стерильным ножом снимают верхний слой толщиной 1,5-2,0 см и из середины куска набирают стерильной ложкой 200-300 г почвы. Смешанный образец, составленный из пяти отдельно взятых проб почвы, должен весить не менее 1 кг.

При исследовании образцов из глубинных слоев почвы (от 0,75 до 2 м) пользуются специальным буром с полостью. На заданной глубине полость бура открывается, наполняется почвой, затем механически закрывается, и бур извлекают на поверхность.

Пробы почвы, взятые для анализа, переносят в стерильные банки с ватно-марлевыми пробками и покрывают стерильной пергаментной бумагой. К каждой банке приклеивают этикетку с указанием даты и номера пробы. В сопроводительном документе отмечают характер почвы, расположение источников загрязнения, площадь обследуемой территории, данные, характеризующие климат местности и т. п.

Все пробы помещают в деревянный ящик с гнездами и немедленно транспортируют в лабораторию. Если нет возможности приступить к исследованию почвы в тот же день, то допускается хранение проб в холодильнике при 1-2° С в течение суток.

Подготовка проб почвы к исследованию. Образцы почвы, отобранные на одном участке из нескольких точек, хорошо перемешивают, освобождают от крупных включений (щебня, камней, корней, стекол). От среднего образца отделяют 200-300 г и вносят в стерильную посуду. Затем почву дробят в стерильной ступке, просеивают через стерильное сито на стерильную бумагу и берут для исследования навеску в 30 г. Навеску почвы высыпают в стерильную колбу вместимостью 500 мл и доливают 270 мл стерильной водопроводной воды, получают разведение почвы 1:10. Взбалтывают почвенную взвесь 10-15 мин и из приготовленного разведения 1:10 без отстаивания готовят ряд последовательных десятикратных разведений по общепринятой методике. При анализе чистых почв ограничиваются 3-4 разведениями (до 1:1000, 1:10000), при исследовании загрязненных почв используют разведения — до 1:100000, 1:1000000.

Определение общего количества бактерий в почве проводят аналогично исследованию воды. Показатели общего количества бактерий для различных видов почв представлены в табл. 55.

Определение БГКП как показателя фекального загрязнения проводят двумя методами: титрационным и методом мембранных фильтров.

Из первоначального разведения почвенной взвеси 1:10 стерильной пипеткой берут 10 мл, что соответствует 1 г почвы, и засевают во флаконы с 50 мл среды Кесслер. Затем из каждого разведения почвы засевают по 1 мл в пробирки с поплавками, содержащими 9 мл той же среды. Посевы выращивают в термостате 24 ч при 37° С.

Просматривают посевы (при задержке роста посевы оставляют на третьи сутки). Отсутствие газообразования и помутнения в бродильных сосудах со средой Кесслер через 48 ч позволяет дать отрицательный ответ.

При наличии в средах газообразования и помутнения или только помутнения из этих сосудов производят высев петлей на сектора среды Эндо в чашках Петри. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 37° С 24 ч.

Просматривают посевы. Отсутствие роста на среде Эндо дает право на отрицательный ответ.

Если на среде Эндо вырастают типичные для кишечной палочки колонии, то из них делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Если проба на оксидазу отрицательная, то проверяют ферментативные свойства выделенной культуры путем посева на полужидкую среду с глюкозой. Посевы помещают в термостат на 24 ч при 37° С.

Просматривают посевы. Появление в среде кислоты и газа подтверждает наличие кишечной палочки в исследуемом разведении почвы.

Коли-титр почвы определяют по наименьшему объему, в котором обнаруживают БГКП (показатели коли-титра для различных видов почв представлены в табл. 55).

Таблица 55. Схема оценки санитарного состояния почвы по микробиологическим показателям

Метод мембранных фильтров применяют при исследовании малозагрязненных почв. Через стерильные мембранные фильтры № 3 пропускают по 10 мл почвенной взвеси из разведений 1:10, 1:100, 1:1000. Дальнейший ход исследования аналогичен определению кишечных палочек в воде. Метод мембранных фильтров позволяет сократить срок исследования до двух суток. Результаты анализа выражают коли-индексом. Коли-индекс почвы — это количество кишечных палочек в 1 г почвы.

Примечание. Среда Кесслер содержит лактозу, которую сбраживают БГКП, и генциановый фиолетовый, задерживающий рост грамположительной микрофлоры.

Из всех приготовленных почвенных разведений (от 1:10 до 1:1000000) по 1 мл вносят в два параллельных ряда стерильных пробирок. Один ряд пробирок прогревают при 80° С 15 мин для освобождения от неспороносной микрофлоры. Затем во все пробирки наливают по 9 мл расплавленной и остуженной до 45° С среды Вильсона — Блера, приготовленной ex tempore. Пробирки вращают между ладонями, чтобы посевной материал равномерно распределился в питательной среде, и быстро опускают их в холодную воду для удаления кислорода и охлаждения среды. Посевы выращивают при 43° С 24 ч.

C. perfringens дает рост в глубине среды в виде черных колоний. Газообразование регистрируется по разрыву питательной среды. В мазках, приготовленных из колоний, обнаруживают грамположительные крупные палочки со спорами овальной формы, расположенные центрально или субтерминально.

Предельное разведение почвенной взвеси, которое дает на среде Вильсона — Блера рост C. perfringens, означает титр этого микроба в почве (см. табл. 55). Наличие в почве C. perfringens является косвенным показателем присутствия в ней и других клостридий — возбудителя столбняка (C. tetani), возбудителя ботулизма (C. botulinum).

В почве определяют также количество термофильных бактерий в 1 г. Почва, в которой много кишечных палочек и мало термофилов, может рассматриваться как загрязненная фекалиями.

Среда Кесслер. К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят 20-30 мин, фильтруют через вату, прибавляют 10 г лактозы и доводят объем до 1 л. Устанавливают рН 7,4-7,6. Добавляют 4 мл 1% водного раствора генцианового фиолетового. Среду разливают в колбы и пробирки с поплавками. Стерилизуют 15 мин при давлении 0,5 атм (112° С). Среда имеет фиолетовый цвет.

Контрольные вопросы

1. В каких случаях проводят санитарно-бактериологическое исследование почвы?

2. Какие определения включают санитарно-бактериологический анализ почвы?

3. Как проводят отбор проб почвы?

4. Какими методами определяют наличие БГКП в почве?

Задания

1. Приготовьте из почвенной взвеси в разведении 1:10 ряд последовательных разведений 1:100, 1:1000,1:10000 и проведите определение микробного числа в данной пробе почвы.

2. Возьмите у преподавателя готовые посевы разведений почвы на среде Вильсона — Блера, определите титр C. perfringens. Сделайте мазки из колоний, окрасьте по Граму. Найдите под микроскопом в мазках C. perfringens и покажите преподавателю. Результаты микроскопии зарисуйте в тетрадь.

Источник

Микробиологический анализ почвы

Состояние почв имеет важное биологическое значение. Грунты являются основным местом обитания широкого круга микроорганизмов, которые способны попадать в другие среды, обсеменять воздух, воду, растения. Состояние почвы оценивается в зависимости от степени ее бактериальной загрязненности – чрезвычайно опасная, опасная, умеренно опасная и чистая.

Микробиологическое исследование — это комплексное исследование почвы, позволяющее определить наличие и численность микрофлоры, основные группы бактерий в определенной местности/регионе/участке. МИ является важным методом оценки экологической безопасности и санитарного состояния грунтов и проводится:

при выборе участка для возведения жилых домов, лечебных учреждений, водозаборных сооружений, объектов детского назначения и других;
при определении пригодности земли для сельского хозяйства;
при исследовании экологического состояния грунтов в рамках производственного лабораторного контроля;
после аварийных сбросов неочищенных сточных вод, имеющих бактериальное загрязнение;
в рамках профилактических, токсикологических, экологических и санитарных исследований;
в иных регламентированных случаях.

БАК-анализ почв рекомендуется выполнять с участков, где возможен прямой контакт человека с почвой (индивидуальная застройка, дачные и приусадебные участки и др.).

Санитарно-микробиологический анализ почвы (БАК) включает определение:

общего количества бактерий в 1 гр. почвы;
титра санитарно-показательных бактерий (энтерококков и БГКП);
термофильных бактерий в 1 гр. почвы;
патогенных микроорганизмов: шигелл, сальмонелл, возбудителей столбняка, ботулизма (по эпидемическим показаниям);
индекса лактозоположительных кишечных палочек;
общего количества споровых и сапрофитных микроорганизмов;
показателей биологической активности;
нитрифицирующих и аммонийфицирующих бактерий;
яиц биогельминтов (в рамках гельминтологического исследования);
цист.

Количество показателей и необходимость углубленного анализа определяются индивидуально.

Результаты микробиологического анализа почвы позволяют оценить:

состояние грунтов на различных участках – в черте города, на территориях для предполагаемого строительства, в оздоровительных и санаторных учреждениях, зонах рекреации, детских дошкольных организациях, на водозаборах и других;
эффективность очистки стоков на городских и локальных очистных сооружениях;
контроль процессов самоочищения грунтов после бактериального загрязнения;
реальное состояние грунта, подвергшегося загрязнению опасными токсическими веществами.

Кому необходимо проводить данный анализ?

Перечень организаций и предприятий, обязанных проводить микробиологический анализ почв с территорий, прилегающих к объекту и за его пределами, определен требованиями санитарных правил и является довольно обширным. Сюда входят все объекты, деятельность которых связана с имеющим место или возможным загрязнением почвенного покрова: лечебные учреждения, станции очистки сточных вод, животноводческие комплексы, предприятия пищевой промышленности, объекты, рядом с которыми расположены полигоны ТБО, выгребные ямы и другие. Также исследование актуально для индивидуальных застройщиков и юридических лиц, планируемых возведение того или иного объекта, жилого дома (на стадии выбора земли).

Как проводится отбор проб почвы

Места для отбора проб зависят от целей и задач исследования: на территории 1000 м 2 выбирают два участка площадью 25 м 2 , один из которых располагают около источников загрязнения (свалки, выгребные ямы, мусорные ящики), а другой, контрольный – на отдалении от него. На каждом из участков намечают 5 точек, из которых осуществляют отбор: 4 по углам и 1 в центральной части либо все 5 по диагонали.

Для бактериологического (БАК) исследования поверхностного слоя грунта пробы отбирают на глубине до 20 см стерильной лопаткой либо совком. Выкапывают цельный кусок, из которого стерильным ножом срезают верхний слой 1,5 – 2 см, и из середины отбирают 200-300 гр. при помощи стерильного инструмента. Образец, который смешивают из 5 отдельно взятых проб, должен составлять не меньше 1 кг.
При изучении микробиологического состава глубинных слоев почвы (0,75-2 м) используют специальный бур с полостью внутри, которая открывается на заданной глубине, почва попадает внутрь оборудования, бур закрывается и извлекается на поверхность.

Отобранные для микробиологического исследования пробы почвы собирают в стерильные банки с пробками, покрывают сверху стерильной пергаментной бумагой. Каждая банка маркируется этикеткой с указанием даты отбора и номера пробы. В акте отбора пробы указывается площадь обследуемой территории, характер почвы, особенности климата, расположение ближайших источников загрязнения и другие данные. Все пробы транспортируют в лабораторию в деревянном ящике.

Услуги по отбору и анализу проб почвы от ООО «ПромЭнерго»

Лаборатория ООО «ПромЭнерго» выполняет микробиологическое исследование почвы на все, актуальные в рамках оценки показатели, а также предлагает услуги по отбору проб грунта для анализа с земельных участков в Москве и Московской области.

современная материально-техническая база;
укомплектованный штат опытных сотрудников;
собственный автопарк;
налаженная и простая схема сотрудничества;
безоговорочное соблюдение договорных обязательств;
разовые услуги и работа на долгосрочной основе;
экспертные заключения, имеющие юридическую силу;
конкурентные цены, ниже, чем средние по Москве.

Заказать услуги лаборатории можно через форму на сайте либо по телефонам +7 (499) 390-11-86, +7 (499) 390-11-94.

Источник