Санитарно-показательные микроорганизмы почвы.
К санитарно-показательным микроорганизмам, которые определяют в почве, относятся БГКП, Clostridium perfringens, термофильные и нитрифицирующие бактерии (табл. 8).
По количеству БГКП судят о фекальном загрязнении почвы и о наличии прочих энтеробактерий. Важным критерием санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению является содержание Clostridium perfringens. Эти микроорганизмы свидетельствуют о фекальном загрязнении, при этом эшерихии исчезают уже через 4—5 мес, а клостридий обнаруживают в титре 0,01 г. Определение термофильных бактерий помогает оценить загрязнение почвы навозом, компостом или сточными водами и стадию разложения их органического субстрата. Появление нитрифицирующих бактерий указывает на развитие процесса самоочищения. Для более полной оценки процесса самоочищения определяют также группы микроорганизмов, быстро разрушающих органический субстрат: бациллы, актиномицеты, грибы.
Таблица 8. Требования к микробиологической чистоте почв
| Категория почвы | Титр БГКП | Титр нитрифици-рующих бактерий | Титр клостридий | Индекс термофильных микроорганизмов | |||||||
| Чистая Загрязненная Сильно загрязненная | >1,0 0,9-0,01 0,1 0,09-0,001 0,001 0,009-0,0001 ОЧС, а в чистых ОМЧ = ОЧС или ОМЧ Сочетание ОМЧ и нитрификаторов используют для распознавания и отличия чистых почв от почв, бывших загрязненными, но находящихся на стадии минерализации. Для них характерно низкое ОМЧ, но высокое число нитрификаторов. То же самое можно сказать и при сопоставлении общего числа сапрофитов и процентов споровых аэробов. Если процент споровых форм к ОЧС высок (40—60%), то это характерно для чистых почв, если же низок (25%), то почва загрязнена. Отбор и подготовка проб. Перед отбором пробы заполняют сопроводительные документы с описанием местности (характер рельефа, растительности и т.д.), предполагаемых источников загрязнения. Пробы отбирают с прямоугольного участка размером не менее чем 5 х 5 м из 5 точек («метод конверта»). При этом в условиях асептики берут с глубины 20—25 см образцы для приготовления смешанной пробы весом 1 кг. Пробу помещают в стерильную посуду, маркируют. Исследование пробы желательно проводить в тот же день, допускается хранение материала в течение 24 часов при температуре 4-5ºС. Перед исследованием образцы почвы освобождают от крупных включений, растирают в ступке и просеивают через стерильное сито с диаметром пор 3 мм. Масса навесок для исследования зависит от цели исследования. Навеску почвы помещают в стерильную колбу и заливают стерильной водопроводной водой в соотношении 1:10. Полученную смесь встряхивают 10-15 мин, затем 2-3 мин. отстаивают. Полученную суспензию используют для приготовления последующих разведений. Определение ОМЧ. ОМЧ почвы определяют глубинным посевом (на плотной среде) из 10-кратных разведений или методом прямой микроскопии (по Перфильеву). Для глубинного посева готовят несколько разведений почвенной суспензии (10 -2 , 10 -3 , 10 -4 и т.д.) Для посева выбирают разведения исходя из загрязненности почвы. По 0,1 мл выбранных разведений смешивают с 40 мл расплавленного и остуженного до 45ºС питательного агара, после чего выливают вторым слоем в чашки Петри с питательным агаром. Посевы инкубируют при 28-30ºС в течение 72 часов и подсчитывают количество выросших колоний. Для подсчета колоний выбирают такие разведения почвенной суспензии, при которых на чашках вырастает от 50 до 150 колоний. Затем делают пересчет на 1 г почвы с учетом разведений. При использовании прямого метода по Б.В. Перьфильеву к 1 мл почвенной суспензии в разведении 1:10 добавляют 1-2 капли раствора акридинового оранжевого. Затем каплю суспензии помещают в капиллярную камеру. Капилляр помещают на предметное стекло, фиксируют парафином и исследуют при помощи люминесцентной микроскопии. Затем делают пересчет на 1 г почвы. Источник САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫСанитарно-показательные микроорганизмы (СПМ) – это представители нормальной микрофлоры, которые выделяются естественным путем в окружающую среду и там сохраняются, поэтому служат показателями санитарного неблагополучия, потенциальной опасности исследуемых объектов. Так, если на объектах обнаруживают нормальных обитателей кишечника, делают заключение о наличии фекального загрязнения и возможном присутствии патогенных энтеробактерий. Так как патогенных представителей меньше и выделить их труднее, то вначале выявляют санитарно-показательные микроорганизмы в окружающей среде, а после их выявления можно проводить поиск патогенных. СПМ условно разделяют на 3 группы: 1.Группа А включает обитателей кишечника человека и животных, эти микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят бактерии группы кишечной палочки (БГКП) – эшерихии, энтерококки, протеи, сульфитвосстанавливающие клостридии (С. perfringens), термофилы, бактериофаги, ацинетобактер, аэромонады. 2.Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. В нее входят a- и b-гемолитические стрептококки, стафилококки (плазмокоагулирующие, лецитиназоположительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые). 3.Группа С включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, сине-зеленые водоросли. Санитарно-показательные микробы должны отвечать следующим требованиям: они должны постоянно содержаться в выделениях человека и теплокровных животных и поступать в окружающую среду в больших количествах; не должны иметь другого природного резервуара, кроме организма человека и животных; после выделения их в окружающую среду, должны сохранять жизнеспособность в течение сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выводимых из организма теми же путями; СПМ не должны размножаться в окружающей среде; не должны изменять свои биологические свойства в окружающей среде; должны быть типичными, чтобы их диагностика, индикация и идентификация осуществлялась без особого труда. Санитарно-показательные бактерии окружающей среды. 1.Вода – бактерии группы кишечной палочки (БГКП), энтерококки, стафилококки. 2.Почва – БГКП, энтерококки, термофилы, возбудители газовой гангрены. 3.Воздух – бета-гемолитические стрептококки, стафилококки. 4.Пищевые продукты – БГКП, энтерококки, стафилококки, протей. 5.Предметы обихода – БГКП, фекальные стрептококки, стафилококки. САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СМЫВА С РУК: ЦЕЛЬ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель: Научиться брать смыв с рук и проводить санитарно-бактериологическое исследование для оценки санитарного состояния рук. Знать состав среды Кесслера. День 1: Взятие смыва с рук стерильной увлажненной салфеткой и посев в среду Кесслера для обнаружения E.coli. Инкубация в термостате 44 о С 24 часа. День 2: Учет роста на среде Кесслера (состав среды Кесслера (МПБ + желчь + лактоза + генцианфиолетовый + поплавок) — (газообразование при 44 0 С).Пересев на среду Эндо. День 3: Учет роста красных колоний на среде Эндо. Приготовление мазка, окраска по Граму, микроскопия. Оксидазный тест. МИКРОФЛОРА ВОЗДУХА Микрофлору воздуха можно условно разделить на постоянную, часто встречающуюся, и переменную, представители которой, попадая в воздух из свойственных им мест обитания, недолго сохраняют жизнеспособность. Постоянно в воздухе обнаруживаются пигментообразующие кокки, палочки, дрожжи, грибы, актиномицеты, спороносные бациллы и клостридии и др., т.е. микроорганизмы, устойчивые к свету, высыханию. В воздухе крупных городов количество микроорганизмов больше, чем в сельской местности. Над лесами, морями воздух содержит мало микробов (в 1 м3 – единицы микробных клеток). Дождь и снег способствуют очищению воздуха от микробов. В воздухе закрытых помещений микробов значительно больше, чем в открытых воздушных бассейнах, особенно зимой, при недостаточном проветривании. Состав микрофлоры и количество микроорганизмов, обнаруживаемых в 1 м3 воздуха (микробное число воздуха), зависят от санитарно-гигиенического режима, числа находящихся в помещении людей, состояния их здоровья и других условий. При чихании, кашле, разговоре в воздух выбрасывается множество капелек жидкости, внутри которых содержатся микроорганизмы. Мелкие капельки образуют стойкие аэрозоли и могут часами удерживаться в воздухе во взвешенном состоянии. Заражение бактериями в этом случае происходит воздушно-капельным путем, так передаются грипп, корь, коклюш, легочная форма чумы и др. При заражении «пылевым» путем микроорганизмы находятся в выделениях больных (мокроте, слизи) и окружены белковым субстратом, поэтому они более устойчивы к высыханию. Когда такие капли высыхают, они превращаются в бактериальную пыль, которая имеет диаметр от 1 до 100 мкм. У частиц диаметром более 100 мкм сила тяжести превышает сопротивление воздуха, и они быстро оседают. Пылевой способ играет важную роль в эпидемиологии туберкулеза, дифтерии, туляремии и др. МИКРОФЛОРА ВОДЫ Вода является естественной средой обитания микроорганизмов, она отражает микробный пейзаж почвы, так как микроорганизмы попадают в воду с частичками почвы. В воде формируются биоценозы с преобладанием микроорганизмов, которые адаптировались к определенным условиям. В 1 мл воды количество микробов может превышать несколько миллионов. Количественный и качественный состав микробиоценозов зависит от физико-химического состояния, температуры, рН, от концентрации минеральных и органических веществ, кислорода, углекислого газа, скорости движения воды, от массивности поступления ливневых и сточных вод. С экологической точки зрения всю микрофлору водоемов разделяют на две группы: автохтонную (или водную) и аллохтонную, попадающую извне. Автохтонная флора – это микроорганизмы, живущие и размножающиеся в воде. К ним относятся аэробные кокки: микрококки, сарцины; бактерии рода Proteus, рода Pseudomonas; представители рода Leptospira. Анаэробных бактерий в чистых незагрязненных водоемах мало. Микроорганизмы воды играют важную роль в круговороте веществ в природе. Они выполняют роль мусорщиков, расщепляют клетчатку, органические отходы. Вместе с загрязненными ливневыми, талыми и сточными водами в озера и реки попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтерококки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций – брюшного тифа, паратифов, дизентерии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций и др., поэтому вода является фактором передачи многих инфекционных заболеваний. Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный вибрион, легионеллы). Вода артезианских скважин практически не содержит микроорганизмов. Микрофлора воды океанов и морей содержит различные микроорганизмы, например, галофильные вибрионы, поражающие моллюски и некоторые виды рыб, при употреблении которых в пищу развивается пищевая токсикоинфекция. По степени микробного заражения воды различают три зоны: полисапробная зона – сильно загрязненная вода, бедная кислородом, богатая органическими веществами, в 1 мл ее содержание бактерий достигает 1 млн; мезосапробная зона – умеренно загрязненная вода, в ней происходит минерализация органических веществ с активными процессами нитрификации и окисления; олигосапробная зона чистой воды, в ней количество микроорганизмов в 1 мл воды составляет десятки и сотни, E.coli встречается в количестве нескольких клеток в 1 л воды. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩИХ И ТЕРМОТОЛЕРАНТНЫХ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ. Определение общих колиформных бактерий (ОКБ).При анализе почв, для которых предполагается невысокая степень фекального загрязнения, рекомендуется использовать титрационный метод. В качестве ускоренного метода для анализа слабозагрязненных почв можно использовать метод мембранной фильтрации. При анализах проб с предполагаемой высокой степенью фекального загрязнения целесообразно проводить прямой посев разведении суспензии на поверхность среды Эндо. Титрационный метод. Из первого разведения почвенной суспензии (1:10), прошедшей предварительную обработку, стерильной пипеткой берут 10 мл, что соответствует 1 г почвы, и засевают во флаконы с 50 мл жидкой лактозо-пептонной среды или среды Кесслера. Посев меньших количеств (0,01 г; 0,001 г и т.д.) делают по 1 мл из соответствующих разведении почвенной суспензии в пробирки с 9 мл той же среды. Посевы инкубируют в течение 48 ч при 37±1 0 С. Через 24±2 ч инкубации проводят предварительную оценку посевов. При отсутствии газообразования и помутнения через 48 ч инкубации выдают отрицательный ответ. При наличии в посевах признаков роста (помутнения и газообразования или только помутнения) производят высев на среду Эндо и инкубируют в течение 18—24 ч при температуре 37±1 0 С. При наличии роста на поверхности среды Эндо розовых или красных колоний, малиновых с металлическим блеском или без него проводят микроскопию колоний с последующей постановкой оксидазного теста. Метод мембранной фильтрации. Метод основан на фильтрации установленного объема — 5-10 мл почвенной суспензии первого разведения (1:10). Метод фильтрации почвы через мембранные фильтры проводится так же, как и фильтрация воды. После окончания фильтрования фильтр переносят, не переворачивая его, на питательную среду Эндо с добавлением розоловой кислоты. Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной пробы, номера и даты посева. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре 37±1 0 С в течение 24±2 ч. Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобною типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и подтверждают их принадлежность к ОКБ (наличие оксидазной активности, отношение к окраске по Граму, ферментация лактозы до кислоты и газа). Прямой поверхностный посев на агаризованные питательные среды. Посев почвенной суспензии в количестве 0,1 или 0,2 ми производят на поверхность среды Эндо шпателем. Посев при анализе сравнительно чистых почв производят из разведений от 1:10 до 1:1000, т.е. от 10 -1 до 10 -3 . При работе с загрязненными почвами обычно используют разведения до 10 -6 . Посевы выращивают в термостате при 37±1°С в течении 24 ч и проводят идентификацию выросших микроорганизмов аналогично тому, как изложено при описании титрационного метода и подсчета количества колиформных бактерий в 1 г почвы. Для этого среднее число колиформных колоний, выросших на чашке, умножают на степень десятикратного разведения. Результат выражают индексом. Источник Микрофлора почвы и методы её санитарно-гигиенического состояния.ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ КАФЕДРА БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ И МИКРОБИОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМы и окружающая среда Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов очной формы обучения по дисциплине С2.Б.12 – микробиология Пятигорск 2012 УДК 576. 8. 097 (076.5) ББК 52.6 я 73 Д 68 Рецензент: ст. преп. каф. биохимии и микробиологии к.б.н. Н.В. Постникова Д Микроорганизмы и окружающая среда: методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов заочной формы обучения по дисциплине С2.Б.12 – микробиология / Е.Г. Доркина. – Пятигорск: Пятигорская ГФА. 2012. – 29 с. Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов по микробиологии «Микроорганизмы и окружающая среда» составлены в соответствии с Примерной программой по микробиологии, утвержденной в соответствии с ФГОСТ-3 ВПО для студентов заочной формы обучения. В материалах указаний содержатся краткие сведения о микрофлоре почвы, воды, воздуха, организма человека и ее значении; понятия о санитарно-показательных микроорганизмах, описания методов оценки санитарно-гигиенического состояния объектов окружающей среды, причины дисбактериозов и препараты, предназначенные для нормализации нормальной микрофлоры кишечника. Доступная форма изложения поможет студентам в усвоении материала, написании вопросов контрольной работы и решению задач и упражнений по данному разделу. УДК 576. 8. 097 (076.5) Допущено к внутривузовскому изданию проф. _____________________ В.В. Гацан Протокол № 516 от « » 2012 г. Ó Пятигорская государственная фармацевтическая академия, 2012 Содержание 1. Значение санитарно-микробиологических исследований окружающей среды. Понятие санитарно-показательных микроорганизмов …………………………………………………………………..4 2. Микрофлора почвы и методы её санитарно-гигиенического состояния. 6 3. Микрофлора воды и методы оценки её санитарно-гигиенического состояния………………………………………………………………..9 4. Методы исследования микробиологической чистоты воды ……….11 5. Микрофлора воздуха и методы оценки её санитарного состояния..13 6. Микрофлора тела человека.………….…………………………. …..17 8. Микрофлора верхних дыхательных путей.…………….…………. 19 9. Микрофлора пищеварительного тракта ……………………………..20 10. Значение микрофлоры человека ……………….……………………21 11. Понятие дисбиоза (дисбактериоза)……………………….………….23 12. Препараты для восстановления микрофлоры кишечника (эубиотики)…………………………………………….………………25 13. Методы санитарно-бактериологического исследования смывов с рук аптечных работников, посуды и оборудования……………………27 ВВЕДЕНИЕ ЦЕЛЬ РАЗДЕЛА. Изучить микрофлору почвы, воды, воздуха, микрофлору тела человека и ее значение, фитопатогенные микроорганизмы, типы взаимоотношений между микроорганизмами в микробиоценозах и другими организмами; уметь использовать эти знания для оценки санитарно-гигиенического состояния почвы, воды, воздуха; помещений, посуды, оборудования и персонала аптеки в соответствии с требованиями нормативных документов. УЧЕБНО-ЦЕЛЕВЫЕ ВОПРОСЫ РАЗДЕЛА. Распространение микроорганизмов в почве, воде и воздухе. Санитарно-гигиеническое значение участия микробов в круговороте веществ в природе. Источники и пути попадания паразитических микробов в почву, воду и воздух; условия и сроки выживания. Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах. Принципы санитарно-микробиологических исследований почвы, воды, воздуха. Микрофлора тела человека и её роль в норме и при патологии. Понятие о гнотобиологии. Аутохтонная и аллохтонная микрофлора. Дисбактериоз (дисмикробиоз). Факторы, влияющие на состав и функции микрофлоры. Препараты для восстановления микрофлоры кишечника (эубиотики). Санитарно-бактериологическое исследование с рук аптечных работников, посуды и оборудования аптеки. 1. Значение санитарно-микробиологических исследований окружающей среды. Понятие санитарно-показательных микроорганизмов. Медицинская микробиология изучает экологические особенности патогенных, условно-патогенных и сапрофитных микроорганизмов и их взаимоотношение с организмом хозяина; изучает загрязнение микроорганизмами окружающей среды и формирование источников инфекционных заболеваний. Окружающая среда не является средой обитания для патогенных микроорганизмов, так как они в ней не размножаются. Патогенные и условно-патогенные микробы обитают в организме больных и бактерионосителей. Люди и теплокровные животные служат резервуаром и источником распространения инфекционных заболеваний. В окружающую среду патогенные микроорганизмы и представители нормальной микрофлоры макроорганизма попадают, в основном, двумя путями: фекальным и воздушно-капельным. Заражение окружающей среды патогенными микробами делает её фактором передачи инфекции. Из почвы, воды и воздуха микроорганизмы могут попадать и загрязнять пищевые продукты, лекарственное сырьё и препараты, производственные помещения аптек; попадать в организм человека и вызывать заболевания. Для выявления в окружающей среде микроорганизмов, оказывающих неблагоприятное воздействие на состояние здоровья человека, проводятся санитарно-бактериологические исследования почвы, воды, воздуха, пищевых продуктов. Методы выявления микроорганизмов в объектах окружающей среды, методы контроля ее санитарного состояния и гигиенического нормирования разрабатывает санитарная микробиология. В практике санитарно-микробиологических исследований используется определение общей микробной обсемененности, патогенных, условно-патогенных и санитарно-показательных микроорганизмов. Обнаружение патогенных микроорганизмов служит показателем прямой эпидемической опасности и позволяет принять соответствующие меры по борьбе с инфекционными заболеванием. Однако обнаружение в объектах окружающей среды патогенных микроорганизмов затруднено, т.к. они пребывают там временно, содержатся в небольших количествах, а методы их выявления длительны и трудоёмки. Для оценки санитарного состояния объектов окружающей среды чаще применяются косвенные методы: 1) определение общей микробной загрязнённости; 2) выявление санитарно-показательных микроорганизмов. К санитарно-показательныммикроорганизмам (СПМО) относятся представители облигатной (иногда факультативной или транзиторной) микрофлоры кишечного и респираторного отдела организма человека и теплокровных животных. Они обладают следующими свойствами: а) постоянно выделяются в большом количестве с калом из кишечника или капельками слизи из респираторного тракта, т.е. теми же путями, что и патогенные бактерии; б) постоянно обитают в естественных полостях человека и животных и не имеют других местобитания; в) способны сохраняться в окружающей среде в течение сроков, близких к срокам выживания некоторых патогенных бактерий; г) не способны интенсивно размножаться в окружающей среде, т.е. их количество остаётся постоянным определённый период времени после попадания в окружающую среду; д) легко обнаруживаются современными микробиологическими методами и поддаются количественному определению; е) являются достаточно типичными для дифференциации от других видов и достаточно стабильными по своим признакам. Санитарно-показательные микроорганизмы косвенно указывают на возможное присутствие патогенных микроорганизмов и свидетельствуют о загрязнённости окружающей среды выделениями человека и животных. Если повышается их количество в объектах окружающей среды, повышается и вероятность наличия в ней патогенных и условно-патогенных организмов. Основной показатель фекального загрязнения почвы и воды — бактерии группы кишечной палочки (БГКП) или колиформные бактерии. Водух оценивают по содержанию стафилококков и стрептококков, попадающих в него вместе с другими микробами из дыхательных путей и полости рта человека. К СПМО относят также эшерихии, клостридии, энтерококки, колифаги (бактериофаги). Общая микробная загрязнённость оценивается по микробному числу – общему количеству микроорганизмов, содержащихся в единице объёма или массы исследуемого объекта (1 мл воды, 1 г почвы, 1 м 3 воздуха). Содержание санитарно-показательных микроорганизмов оценивается по двум показателям – титру и индексу. Титр – минимальная масса или объём, где обнаруживаются данные бактерии. Индекс – количество санитарно-показательных микроорганизмов, содержащихся в 1 л жидкости, 1 г плотных веществ, в 1 м 3 воздуха. Микрофлора почвы и методы её санитарно-гигиенического состояния. Из всех объектов окружающей среды почва особенно изобилует микроорганизмами, где они находят наиболее благоприятные условия для своей жизнедеятельности (питательные вещества, достаточное количество влаги, защищённость от солнечных лучей). Микробные биоценозы почвы характеризуются большим разнообразием видов. В их состав входят бактерии, грибы, лишайники, простейшие, бактериофаги, водоросли, вирусы. К почвенным бактериям относятся аммонифицирующие бактерии, участвующие в минерализации белков (p. Pseudomonas, p. Proteus, спорообразующие палочки p. Bacillus), азотфиксирующие бактерии (p. Azotobacter, Azomonas, Mycobacter), нитрифицирующие (p. Thiobacillus), клубеньковые (p. Rhizobium), серо- и железобактерии. В почве находятся многочисленные представители грибов, актиномицетов. Количество простейших в почве составляет 500 – 500 000 на 1 г почвы. Микроорганизмы почвы участвуют в процессах почвообразования и самоочищения почвы, в круговороте углерода, азота и других элементов. Микробы распределены в различных слоях почвы неодинаково: а) на поверхности и в небольшом верхнем слое содержится мало микроорганизмов (гибнут под воздействием УФ-лучей и высушивания); б) в верхнем слое почвы толщиной 10-20 см содержится наибольшее количество микроорганизмов, здесь активно протекают процессы разложения органических веществ: в) по мере углубления количество микроорганизмов снижается и на глубине 3-4 м встречаются единичные особи. Количественный и качественный состав микрофлоры почвы зависит от состава почвы (плодородия), рН, температуры, освещения, количества влаги, способов обработки почвы, времени года и других факторов. В бедных песчаных почвах содержится10 5 микробных тел на 1 г почвы, в обрабатываемых почвах – 10 8 -10 9 в 1 г почвы. Много микроорганизмов в почве летом (июнь-август), меньше всего зимой. В почве богатой органическими остатками содержится много гнилостных анаэробных и аэробных бактерий, актиномицетов, грибов и простейших. Особенно много микроорганизмов в культурной почве, на юге, летом, на глубине 10-20 см, т.к. большинство микроорганизмов почвы способно развиваться при нейтральном рН, высокой относительной влажности и температуре 25-45 °C. Вместе с испражнениями, мочой, прочими выделениями, с отбросами и трупами животных и человека, погибших от инфекционных заболеваний в почву попадают бактерии группы кишечной палочки, Str. faecalis, возбудители брюшного тифа, сальмонеллёзов, дизентерии, а также другие патогенные и условно-патогенные микроорганизмы (возбудители холеры), C. perfringens, C. sporogenes. Почва не является благоприятной средой для этих микроорганизмов. Через некоторое время наступает их гибель из-за недостатка питательных веществ, высыхания, действия света, и, в основном, из-за антагонизма постоянных обитателей почвы (бактерий, актиномицетов, грибов). Антагонизм обусловлен выделением бактериоцинов постоянными обитателями почвы, действием бактериофагов, жизнедеятельностью простейших. Тем не менее, патогенные, условно-патогенные микробы и представители нормальной микрофлоры человека и животных некоторое время сохраняются в почве. Сроки выживания неспоровых патогенных бактерий в почве – от нескольких дней до нескольких месяцев. Долго сохраняются в почве споры. Так, споры возбудителя сибирской язвы (Bac. anthracis), столбняка (C. tetani), ботулизма (C. botulinum), газовой гангрены (C. perfringens и т.д.) сохраняются в почве в течение нескольких лет. Кроме того, почва служит местом обитания различных животных (грызунов), на которых паразитируют переносчики возбудителей чумы, туляремии, москитной лихорадки, геморрагических лихорадок, энцефалитов, сельского лейшманиоза и т.д. В почве проходят определённые стадии цисты простейших (амёбы, балантидии). Особенно велика роль почвы в передаче глистных инвазий (в почве находятся яйца аскариды, власоглава, анкилостомид). Обитающие в почве грибы, образующие токсины, могут вызывать алиментарно-токсическую алейкемию, эрготизм, аспергиллёзы, пенициллинозы, мукоромикозы, хромомикозы и т.д. Таким образом, почва является фактором передачи ряда возбудителей инфекционных заболеваний. Особенно много патогенных микроорганизмов встречается в плодородной почве, на полях орошения, куда выпускают сточные воды. Учитывая это, проводят санитарно-гигиенический контроль состояния почвы и мероприятия, направленные на защиту почвы от загрязнения и инфицирования. Для текущего санитарного надзора осуществляют определение общего микробного число (ОМЧ), БГКП, титра строгих анаэробов, термофильных бактерий, нитрифицирующих бактерий. По эпидемическом показаниям проводят определение патогенных микроорганизмов.
Важным критерием санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению является перфрингенс-титр почвы – минимальное количество почвы в г, в котором еще определяется C. perfringens. При фекальном загрязнении почвы уже через 4-5 мес эшерихии исчезают, а клостридии обнаруживаются в титре 0,01 г. На свежее фекальное загрязнение указывают: обнаружение энтерококков, большое количество БГКП при отсутствии нитрифицирующих бактерий и термофилов, относительно высокое содержание вегетативных форм клостридий. Определение термофильных бактерий помогает оценить загрязнение почвы навозом компостом или сточными водами и стадию разложения органического субстрата. Появление нитрифицирующих бактерий указывает на развитие процессов самоочищения. Для более полной оценки процесса самоочищения определяют также группы микроорганизмов, быстро разрушающих органический субстрат: бациллы, актиномицеты, грибы. Для определения микробного числа почвы осуществляют посев десятикратных разведений почвы в глубину или на поверхность сусло-агара (для роста дрожжевой и грибной микрофлоры) и МПА (для роста бактериальной флоры). Затем подсчитывают количество выросших колоний для каждого разведения и вычисляют микробное число, зная, что 1 колония – это 1 клетка. Расчет числа клеток в 1 г почвы с учетом:-навески; разведения;объема посева. БГКП в почве определяют методом бродильных проб или методом мембранных фильтров. При высокой степени загрязнения используют прямой посев почвенной суспензии (1:10) на среду Эндо. Перфрингенс-титр почвы определяется путём посева 10-кратных разведений почвенной суспензии на среду Вильсона-Блера, на которой C. perfringens образует чёрные колонии, а образующийся газ разрывает среду, или на среду Тукаева (молочная среда), на которой данный микроорганизм интенсивно сбраживает лактозу и молоко створаживается, а образующийся газ разрывает сгустки казеина и вытесняет в верхнюю часть пробирки.Расчет: максимальное разведение, где есть признаки роста клостридий. Число термофильных бактерий определяют глубинным посевом на плотные среды с инкубированием при 60°С в течение суток. Титр нитрифицирующих бактерий определяют посевом 10-кратных разведений почвенной суспензии на жидкую синтетическую среду Виноградского. Требования к микробиологической чистоте почвы представлены в таблице. Источник ➤ Adblockdetector |