Ecolog Natural
Экология и природопользование
Приготовление почвенной суспензии и посев на питательные среды
На стерильное часовое стекло, предварительно взвешенное, стерильным шпателем помещают 10 г почвы.
Навеску почвы переносят в колбу емкостью 250 мл, содержащую 90 мл стерильной водопроводной воды, интенсивно взбалтывают вращательным движением в течение 10 мин и дают отстояться грубым частицам почвы.
Затем методом разведения готовят суспензии, содержащие разное количество почвы. С этой целью из предыдущего разведения стерильной пипеткой переносят по 10 мл суспензии в последующую колбу, содержащую также 90 мл стерильной водопроводной воды. Каждую колбу встряхивают в течение минуты.
Из полученных разведений проводят посев на плотные и жидкие среды. При глубинном посеве берут 1 мл почвенной суспензии из более высокого разведения, чем при поверхностном. Суспензию вносят в стерильную чашку Петри, заливают охлажденным до 45 0 расплавленным агаром и перемешивают с ним.
Для учета количества микроорганизмов почвы на жидких средах из каждого разведения, начиная с самого высокого, стерильной пипеткой необходимо взять по 1 мл суспензии и перенести в жидкие среды.
Если численность отдельных групп микроорганизмов в почве небольшая, их выделяют методом обрастания комочков почвы. На пластинах отмытых от следов хлора и прокипяченных, пропитанных 3-5 мл элективной среды по поверхности раскладывают по трафарету 30-40 комочков почвы диаметром 1-2 мм, чашки помещают в термостат.
Для проведения общего микробиологического анализа необходимо сделать посев микроорганизмов на плотные среды — мясо-пептонный агар (МПА) и крахмало-аммиачный агар (КАА), и жидкие среды — среду Виноградского, среду Гильтая. Для обнаружения азотобактера используется метод обрастания комочков почвы.
Все засеянные чашки Петри и пробирки ставят в термостат с температурой 28-30 0 на определенный срок инкубации, затем вынимают и учитывают результат.
Плотные питательные среды:
1. МПА (мясо-пептонный агар) — учитывается численность сапрофитных микроорганизмов, использующих в качестве источника питания органические формы азота.
2. КАА (крахмало-аммиачный агар) — выявляется численность микроорганизмов, усваивающих минеральные формы азота.
. Среда Гетчинсона — применяется для учета денитрофицирующих бактерий.
. Среда Эшби — выявление азотфиксирующих аэробных микроорганизмов путем раскладывания комочков почвы.
Жидкие питательные среды:
1. Среда Гильтая — применяется для определения денитрифицирующих бактерий.
2. Среда Виноградского — используют для определения анаэробных азотфиксирующих бактерий.
микроорганизм пестицид почва загрязнение экологический
Другие статьи по теме
Ограниченность водных ресурсов Казахстана
Состояние водных ресурсов Казахстана оценивается общей недостаточностью, продолжающимся их загрязнением и истощением. Экологические кризисы по характеру протекания можно разделить на две гр .
Влияние загрязнения воды и почвы на здоровье жителей Донецкой области
На территории Донецкой области, которая составляет 4,4% площади государства, сосредоточена пятая часть промышленного потенциала Украины. Высокая концентрация промышленной и сельскохозяйстве .
Обращение с бытовыми отходами на предприятии ОАО Связьтранснефть
В последнее время во всем мире стали больше уделять внимания охране окружающей среды. Это вызвано необходимостью сохранить нормальные условия жизни для нынешнего и будущего поколений. Одна и .
Источник
Большая Энциклопедия Нефти и Газа
Суспензия — почва
Суспензии почвы на плотные питательные среды высевают преимущественно поверхностно. Для этого ага-ризованные питательные среды разливают в стерильные чашки Петри и после охлаждения подсушивают в термостате при 40 С. На поверхность агаровой пластины стерильной градуированной пипеткой наносят 0 05 мл почвенной суспензии из соответствующего разведения, затем стеклянным шпателем Дригальского растирают каплю досуха, при этом открытую чашку держат в вертикальном положении около пламени горелки. [1]
Содержащий суспензию почвы физиологический раствор прогревают затем в водяной бане при 80 в течение 30 мин. Это удаляет вегетативные формы бактерий. [2]
Вторую пробирку с суспензией почвы в бульоне также ставят в термостат при 37, но в анаэробных условиях. Предполагается, что в отсутствие кислорода за 2 дня прорастают лишь споры анаэробных бактерий, а споры Вас. По истечении указанного срока ( 2 дней) пробирку со средой также прогревают при 65 — 70 в течение 30 мин. [3]
В работе [102] изучается суспензионный эффект, возникающий в суспензиях почв и глин. [4]
В работе [102] изучается суспензионный эффект, возникающий в суспензиях почв . [5]
Применяется для борьбы с сорными растениями в посевах кукурузы путем эпрыскивания суспензией почвы до посева, одновременно с посевом или до по-ятления всходов культуры при нормах расхода 1 5 — 3 кг / га. [6]
Применяется для борьбы с сорными растениями в посевах кукурузы путем опрыскивания суспензией почвы до посева, одновременно с посевом или до появления всходов культуры при нормах расхода 1 5 — 3 кг / га. [7]
Кислотность почвы характеризуют по величине рН в водных и солевых вытяжках и суспензиях почвы . [8]
Некоторые вирусы, например ж-вирус картофеля и вирус кустистой махровости томата, при поливе их суспензиями почвы , на которой растут восприимчивые к ним растения, вызывают заражение последних. Не исключена возможность, что почва является для них естественным субстратом. [9]
Перед фильтрованием суспензию почвы в банке взбалтывают и, избегая разбрызгивания, сливают на фильтр по стеклянной палочке, стараясь, чтобы струя попадала не на середину, а на боковую стенку фильтра. [10]
Перед фильтрованием суспензию почвы в банке взбалтывают и, избегая разбрызгивания, сливают на фильтр по стеклянной палочке, стараясь, чтобы струя попадала не на середину, а на боковую стенку фильтра. [11]
В частности, в почвоведении принят в качестве стандартного метода для гранулометрической оценки почв так называемый пипеточный метод. В этом случае взмученную суспензию почвы помещают в цилиндрический сосуд и определяют весовую концентрацию дисперсной фазы на постоянной глубине от поверх-яости жидкости в процессе осаждения суспензии. Определения производят через определенные промежутки времени, отбирая пробы пи-леткой. Взятый пипеткой объем суспензии выпаривают, массу дисперсного материала находят взвешиванием. [12]
Колбу закрывают пробкой и энергично встряхивают 3 мин. По окончании взбалтывания всю суспензию почвы с водой, не давая ей отстояться, осторожно и быстро фильтруют. Фильтрование проводят через сухой беззольный фильтр, на который сверху помещают второй сухой складчатый фильтр из фильтровальной бумаги; в качестве приемника используют сухую мерную колбу емкостью 250 мл. Если первые порции фильтрата окажутся мутными, то его следует перефильтровать через этот же фильтр сразу, не дожидаясь конца фильтрования. По окончании фильтрования колбу с фильтратом следует закрыть сухой пробкой. [13]
Навеску свежей почвы, соответствующую 10 — 50 г сухой почвы, помещают в коническую колбу емкостью 250 — 500 мл и заливают 5-кратным количеством дистиллированной воды с учетом воды, уже содержащейся в свежей почве. Содержимое колбы взбалтывают 3 минуты и немедленно фильтруют через плотный складчатый фильтр, перенося на него хорошо взмученную суспензию почвы . Первые мутные порции фильтрата переносят обратно на фильтр и после окончания фильтрации немедленно приступают к определению. Определение нитратов возможно только из бесцветной и прозрачной вытяжки, не содержащей хлоридов и аммонийных солей. Если вытяжка окрашена или мутна, к ней прибавляют 5 — 10 мл 13 % — ного раствора А12 ( S04) 3 18Н20 и дают отстояться образовавшемуся осадку. [14]
В присутствии СП-8 седиментационный осадок образуется медленно, что обусловливается его пептизирующим действием. Удаление карбонатов из почвы приводит к распаду первичных частиц, поэтому для получения такого же эффекта, как с карбонатной почвой, требуется больший расход ВРП Действительно, как видно из табл. 22, объем осадка в суспензии бескарбонатной почвы всегда меньше, чем объем осадка исходной почвы. Гидролизованный ( ПАНИТ) вызывает небольшую пептизацию частиц типичного серозема. Из сравнения влияния ВРП: К-4, К-6 и ПАНИ-Г на несмытую и подвергшуюся ирригационной эрозии среднесмытую почву видно, что частицы последней склеиваются полимерами К-6 и ПАНИ-Г в более рыхлые агрегаты. К-4 на несмытой и среднесмытой почве проявляет одинаковую способность склеивать микроагрегаты типичного серозема. [15]
Источник
Приготовление почвенной суспензии и посев
Взятие средней почвенной пробы и подготовка образца
Среднюю почвенную пробу получают смешиванием отдельных образцов, количество которых зависит от микрорельефа (ровный, волнистый, склон), степени гетерогенности почвы и ее однородности в ботаническом отношении. Рекомендуют с площади 100 м 2 брать пробу из трех точек; с площади, превышающей 100 м 2 , — из пяти по принципу конверта (четыре в точках по углам и одну — ближе к центру прямоугольника); с 1 га и более — из 15 точек. При исследовании пашни пробы берут с глубины всего пахотного слоя, снимая верхний слой толщиной 2 см; при изучении микрофлоры почвенного профиля — по генетическим горизонтам (снизу вверх).
Почвенный образец берут буром, лопатой и ножом. В поле перед взятием образца их тщательно очищают, затем обрабатывают спиртом и обжигают. Можно ограничиться очисткой этих предметов, если затем несколько раз воткнуть их в почву изучаемого горизонта. Укладывают образец в заранее приготовленную стеклянную широкогорлую стерильную банку, закрывающуюся корковой пробкой, обернутой стерильной бумагой, либо в стерильные пергаментные пакеты или пакеты из плотной бумаги, взятой двойным слоем. На пакеты, банки наклеивают этикетки с указанием места взятия пробы, горизонта и других сведений.
Почвенные образны анализируют в первые сутки. При необходимости допускается хранение их и холодном помещении (и холодильнике) в течение двух дней. Для придания среднему образцу большей однородности, соблюдая все условия асептики, тщательно перемешивают почну, вынимают корни растений, различные включения.
На стерильное часовое стекло стерильным шпателем (или алюминиевой ложкой) помешают 10 г почвы. Чтобы при взвешивании в почву не попали микроорганизмы из воздуха, особенно споры грибов, часовое стекло накрывают другим часовым стеклом. Предварительно стекла взвешивают. Часовые стекла, шпатели и ложки стерилизуют фламбированием.
Навеску почвы переносят в колбу на 250 мл со 100 мл стерильной водопроводной воды, взбалтывают 10 мин (лучше на механической качалке) и дают отстояться грубым частицам почвы.
Одновременно со взятием навески для анализа из средней пробы отбирают 10—20 г почвы для определения влажности, так как полученные при анализе данные пересчитывают на 1 г абсолютно сухой почвы.
Значительно больше микроорганизмов выявляется, если навеску почвы предварительно поместить в стерильную фарфоровую чашку или ступку, увлажнить (0,4—0,8 мл воды или 0,1 %-ным раствором пирофосфата Na4Р2О7 — на 1 г почвы) и 5 мин растирать стерильным резиновым пестиком или пальцем в стерильной резиновой перчатке до пастообразного состояния. Этот прием дает возможность разрушить почвенные агрегаты и десорбировать микроорганизмы с поверхности почвенных частиц и из органоминерального геля.
Перед приготовлением суспензии для каждого образца готовят 2 стерильные колбы на 250 мл; одна содержит 100 мл стерильной водопроводной воды, другая — пустая. Водой из первой колбы растертую почвенную массу смывают в пустую стерильную колбу. Колбу с полученной суспензией встряхивают 5 мин, оставляют на 30 с и готовят разведения, содержащие разные концентрации почвы. 1 мл суспензии в первой колбе соответствует разведению 10 -1 . Последующие разведения (10 -2 ; 10 -3 ; 10 -4 ; 10 -5 ; 10 -6 и т.д.) лучше тоже делать в колбах на 250 мл с 90 мл стерильной водопроводной воды.
Из каждого предыдущего разведения отдельной стерильной пипеткой берут 10 мл суспензии и переносят в следующую колбу с 90 мл воды. Всякий раз пипетку ополаскивают и отставляют. Последующие колбы встряхивают по 1 мин.
Из полученных разведений делают посев на плотные и жидкие среды. Набор сред зависит от задач бактериологического анализа почвы.
На плотные питательные среды посев проводят преимущественно поверхностно. Для этого агаризованные питательные среды разливают в стерильные чашки Петри и после охлаждения подсушивают в термостате при 40 °С. На поверхность агаровой пластины стерильной градуированной пипеткой наносят 0,05 мл почвенной суспензии из соответствующего разведения, затем стеклянным шпателем Дригальского растирают каплю досуха; при этом открытую чашку держат в вертикальном положении около пламени горелки. Посев из каждого разведения проводят минимум на 2—3 параллельных чашках (желательно — на 5).
При определении количества бактерий в почве пахотного слоя для посева на МПА, крахмалоаммиачном агаре (КАА),среде Чапека используют разведения 10 -3 и 10 -4 ; на сусло-агаре, МПА + сусло-агар, бедных средах (нитритный агар), на среде Эшби применяют разведения 10 -2 и 10 -3 . Для почв нижних горизонтов соответственно используют разведения на один порядок меньше.
Для глубинного посева берут 1 мл почвенной суспензии из разведения на порядок меньшего, чем для поверхностного посева.
Суспензию вносят в стерильную чашку Петри, заливают агаром, расплавленным и охлажденным до 45 °С, и смешивают с ним. При глубинном посеве показатели получаются более низкие, чем при поверхностном.
При учете микроорганизмов почвы в жидких средахпоследние разливают в пробирки по 9 мл и стерилизуют. Из каждого разведения почвенной суспензии, начиная с самого высокого, отдельной стерильной пипеткой берут по 1 мл и переносят в жидкую среду. Из каждого разведения засевают минимум 2 пробирки или колбы (лучше 3—5).
Когда численность отдельных групп микроорганизмов в почве небольшая, их выявляют методом обрастания комочков почвы по Виноградскому. Отмытые от следов хлора (см. 7.2.1) и прокипяченные или простерилизованные гелевые пластинки пропитывают 3—5 мл элективной среды для соответствующей группы микроорганизмов. Обычно среду упаривают в сушильном шкафу при 40—50 °С до образования эмалевой поверхности (см. 8.2.1). По поверхности раскладывают по трафарету 40—50 комочков почвы диаметром 1—2 мм.
Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термостат. Если в комочках почвы находятся соответствующие микроорганизмы, то они начинают развиваться и формируют вокруг комочков колонии. Затем вычисляют количество обросших комочков почвы (в % от исходного числа). После определенного срока инкубации при 28—30 °С культуры анализируют.
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Источник