Питательная среда для выделения гонококка сухая
Инструкция по применению
Описание
Форма выпуска
Состав
Показания для применения
Режим дозирования и способ применения
Приготовление реагентов следует проводить в асептических условиях.
В бутылку с основой питательной среды добавляют 100 мл стерильной очищенной воды и выдерживают (30±5) мин, затем помещают на кипящую водяную баню до полного расплавления агара, после расплавления агара выдерживают на водяной бане не более 5 мин.
В бутылку с добавкой питательной среды добавляют 24 мл стерильной очищенной воды и выдержать (20±2) мин до полного растворения при температуре 20-25°С. Растворенную добавку переносят в растворенную и охлажденную до температуры (50±2)°С основу. Среду размешивают, разливают по 3 мл в стерильные пробирки и скашивают. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл стерильного раствора натрия хлорида 0,9% для увлажнения среды.
Среду можно также разливать по 10-15 мл в стерильные чашки Петри. Пробирки или чашки с питательной средой помещают на (24±1) ч в термостате при температуре (37±1)°С для контроля на стерильность.
Готовую питательную среду хранят при температуре (6±2)°С до 7 сут.
Меры предосторожности при применении
Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения (Москва. 1981 г.)
Источник
Определение чувствительности Neisseria gonorrhoeae
Оценка антибиотикочувствительности N.gonorrhoeae представляет собой достаточно сложную методическую проблему. Методы определения чувствительности гонококков в бульоне недостаточно надежны, поэтому следует использовать только метод разведений в агаре или ДДМ.
Питательные среды
Для определения чувствительности N.gonorrhoeae используют гонококковый агар, состоящий из гонококковой агаровой основы (GC Agar Base, BBL) и 1 % комплексной питательной добавки (КПД) (PolyVitex, BioMerieux или собственного приготовления) без гемоглобина. При тестировании карбапенемов и клавулановой кислоты необходимо использовать добавку, не содержащую цистеин.
В КПД входят следующие компоненты:
- Глюкоза — 100 г.
- L-цистеингидрохлорид — 25,9 г.
- L-глютамин — 10 г.
- L-цистин — 1,1 г.
- Аденин — 1 г.
- Никотинамидадениндинуклеотид — 0,25 г.
- Витамин В12 — 0,1 г.
- Тиамина пирофосфат — 0,1 г.
- Гуанина гидрохлорид — 0,03 г.
- Fe(NO3)3 x 6H2O — 0,02 г.
- Парааминобензойная кислота — 0,013 г.
- Тиамина гидрохлорид — 3 г.
Все ингредиенты растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и затем доводят объём до 1 л. КПД стерилизуют фильтрацией через бактериальный фильтр 0,02 мкм. КПД нельзя хранить и автоклавировать, необходимо использовать ex tempore. Полученную смесь асептически вносят в GC агар после автоклавирования и охлаждения до 48 — 50 °С в количестве 1,0 % (объем/объем). Агар разливают в чашки Петри без добавления антибиотиков для ДДМ и с добавлением АБП для метода разведения в агаре.
Средствами выбора для лечения гонореи являются бета-лактамные антибиотики. Однако, среди штаммов N.gonorrhoeae широко распространена резистентность к пенициллину, тетрациклинам и макролидам. В ряде регионов Земного шара отмечают резкое возрастание частоты резистентности гонококков к фторированным хинолонам. Для практики крайне важно то, что до сих пор достоверно не описано случаев резистентности гонококков к цефалоспоринам III поколения, что позволяет рассматривать цефалоспорины III поколения (цефотаксим и цефтриаксон) как препараты выбора для лечения гонореи.
Таким образом, на практике оценивать антибиотикочувствительность гонококков следует только в тех случаях, когда для лечения невозможно или нецелесообразно использовать цефалоспорины III поколения. Такие ситуации складываются при наличии у пациентов аллергии к бета-лактамам или при смешанных гонорейно-хламидийных инфекциях, а также для эпидемиологического мониторинга.
В набор для тестирования N.gonorrhoeae рекомендуется включать фторхинолоны (офлоксацин или ципрофлоксацин), тетрациклины, спектиномицин. Дополнительно для более полной характеристики штаммов и эпидемиологического мониторинга целесообразно изучать чувствительность к пенициллину и цефалоспоринам II — III поколений.
Критерии оценки антибиотикочувствительности Neisseria gonorrhoeae приведены в таблице 22.
Источник
Нейссерии
Автор: врач – клинический фармаколог Трубачева Е.С.
В роду нейссерий присутствуют всего два вида патогенных микроорганизмов — N. meningitidis, он же менингококк, и N. gonorrhoeae, он же гонококк. Все остальные нейссерии являются представителями нормальной микрофлоры человека, обитающей на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и урогенитального тракта. Кроме того, носительство этих микроорганизмов распространено и среди теплокровных животных.
Автор: врач – клинический фармаколог Трубачева Е.С.
В роду нейссерий присутствуют всего два вида патогенных микроорганизмов — N. meningitidis, он же менингококк, и N. gonorrhoeae, он же гонококк. Все остальные нейссерии являются представителями нормальной микрофлоры человека, обитающей на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и урогенитального тракта. Кроме того, носительство этих микроорганизмов распространено и среди теплокровных животных.
Микробиологические аспекты
Основными представителями рода нейссерий являются:
Все нейссерии являются типичными аэробными грамотрицательными кокками, неподвижными, образующими пары или тетрады. Не обладают свойством спорообразования, но менингококк, например, умеет образовывать капсулу. Малоустойчивы во внешней среде, быстро гибнут при высыхании, убиваются практически любым дезинфектантом, и хотя бы с этими микробами у нас почти отсутствует проблема внутрибольничного инфицирования. Правда, ключевое слово «все-таки», «почти», ибо люди остаются людьми, и пациенты не исключение. Но все это, конечно, не касается менингококка, который, в прямом смысле, умеет летать от человека к человеку, передаваясь воздушно-капельным путем, а также через общую вентиляцию, и еще пару лет назад был одним из очень немногих микроорганизмов, которые заставляли надевать СИЗ и сидеть в карантине. О менингококке мы будем говорить отдельно, а сейчас продолжим об общих свойствах всего рода нейссерий.
Практически все представители рода обладают природной чувствительностью к:
бета-лактамам (пенициллинам и цефалоспоринам)
И проявляют природную устойчивость к:
Клинические аспекты:
Зачем вообще стоит знать о непатогенных нейссериях?
Во-первых, мы не знаем, что еще принесет доставший всех до печенок ковид и схемы антибактериальной терапии, которые используются в его лечении, в том числе при отсутствии вторичных бактериальных осложнений (автор в очередной раз изобразил двойной фейспалм, но понимает, почему все это происходит — начиная с пресловутых «временных клинических рекомендаций», которые все-таки стали требовать подтверждения присоединения бактериальной инфекции, и заканчивая внутрибольничными инфекциями, которые никуда не делись, потому что к их распространению есть вполне объективные причины, первой и главной из которых автор видит банальную вымотанность до степени проф. выгорания, и тут хоть обвизжись на тему чистоты рук — без нормально выстроенного режима, в том числе отдыха, эпиднадзор в больничных отделениях просто физически недостижим).
Во-вторых, для нейссерий характерна колонизация слизистых, особенно в детском возрасте, когда в зеве ребенка может определяться до двух видов одномоментно, а при детских тонзиллитах нейссерия вырастет практически в 100% случаев, естественно, в ассоциации с другими патогенами, например, со стрептококком. С возрастом носительство снижается, и к совершеннолетию эти микробы будут выделяться не чаще чем в 2% случаев.
В-третьих, у иммунокомпрометированных пациентов (ВИЧ, онкогематология, ковид, точнее, последствия его лечения и т. п.) нейссерии могут вызывать сепсис, пневмонии, менингиты и т. д., и сбрасывать их со счетов сразу, как возможный контаминат, у такой категории пациентов все-таки не стоит.
Теперь приступим к подробному рассмотрению патогенных представителей нейссерий и начнем с гонококка, он же
Neisseria gonorrhoeae
Гонококк является одним из наиболее проблемных микробов в мире и в плане распространенности, и в плане антибиотикорезистентности. Тому есть очень много причин, в том числе и связанных с медицинской помощью, когда однодневные схемы применения антибиотиков, порочные по своей сути, но используемые в странах, имеющих большие проблемы с доступностью медицинской помощи, потащили их туда, где этих проблем нет. Странно, что те же люди, кто прославлял однодневное применение цефтриаксона, практикуемое в странах экваториальной Африки, отказываются пить профильтрованную через салфетку воду из лужи, что практикуется там же.
Микробиологические аспекты
Гонококк относится к грамотрицательным диплококкам, требовательным к своему культивированию, а именно к таким факторам, как температура и pH среды, и лучше всего растущим на кровяных и шоколадных агарах, так как на обычных средах расти не способен. Умеет образовывать капсулоподобные структуры. Является абсолютным паразитом, так как использует для своей жизнедеятельности вещества из организма человека. При этом неустойчив во внешней среде и, например, при кипячении погибает мгновенно. Любой дезинфектант убивает его также очень быстро.
Клинические аспекты
Гонококки могут инфицировать конъюнктиву, ротоглотку, уретру, цервикальный канал, сначала прикрепляясь к эпителиальным клеткам, а затем проникая внутрь. В месте внедрения образуется острый воспалительный процесс в классическом случае (которого вы можете и не увидеть, так как пациент успел наесться «таблеток из Интернета»), сопровождающийся большим количеством гнойного отделяемого. Далее процесс распространяется как в глубину, так и по поверхности пораженных слизистых оболочек, и без адекватного лечения переходит в хроническую форму. Кроме того, часть гонококков умеет поражать и выживать внутри фагоцитирующих клеток и, таким образом мигрируя внутри организма, забирается в самые отдаленные его отделы, то есть диссеминирует и маскируется вообще подо что угодно.
Что поражается чаще всего:
Уретра, вызывая уретриты
Цервикальный канал, вызывая цервициты
Эндометрий, вызывая эндометриты
Глиссонову капсулу печени
Диссеминированные формы — поражение кожи, суставов, септические артриты, миокардиты, менингиты и т. д.
Существуют бессимптомная и манифестирующая формы гонококковой инфекции, расшифровка коих особого смыла не имеет, так как все понятно по названию.
У мужчин обычно появляется симптоматика уретрита, но до четверти случаев течет совершенно бессимптомно, а эпидидимит является наиболее частым осложнением гонорейной инфекции. Более редкими осложнениями являются стриктуры уретры и простатит.
У женщин в половине случаев гонорейная инфекция носит бессимптомный характер, особенно при инфицировании ротоглотки и прямой кишки. При клинически выраженной (манифестированной) форме она проявляется уретритами, цервицитами, проктитами, вульвовагинитами, циститами, фарингитами и конъюнктивитами, протекающими с обильным гноетечением.
Инкубационный период у мужчин может составлять 3–7 дней, у женщин — до 10.
Терапевтические аспекты
Прежде чем начинать лечить, надо выяснить, насколько дикий и симпатичный гонококк достался вашему пациенту, но в современных условиях на это можно сразу не рассчитывать и считать, что очень сильно повезло, если чувствительность утеряна только к пенициллинам. Для качественной диагностики необходимы количественные, то есть с определением MIC, методики микробиологической диагностики, а не качественный диско-диффузионный метод.
В случае неосложненного цервицита, уретрита или поражения прямой кишки необходимо назначать два препарата с активностью как против гонококка, так и против хламидии в виду высокой их ассоциации. При этом фторхинолоны из-за высокой резистентности к ним у N. gonorrhoeae не могут быть препаратами выбора. Поэтому смотрим в сторону комбинации цефалоспоринов с макролидами при условии ОБЯЗАТЕЛЬНОЙ чувствительности к оным. И никаких одноразовых дозировок — только курсовое применение, иначе хронизация процесса будет обеспечена. О том, как работаю дозо- и времязависимые антибактериальные препараты, автор сотрясала воздух тут. И никаких субклинических дозировок! Не смешите гонококк, у него все равно нет чувства юмора.
Во всех остальных случаях мы ориентируемся в лечении только и исключительно на антибиотикограмму. К чему будет зверье чувствительно, то и назначаем в нормальных, то есть бактерицидных дозах. А пациенту убедительно объясняем, почему терапия носит комбинированный характер и почему речи быть не может «об одном единственном уколе». Да не убьется гонококк, учитывая, как он зарывается в эпителий, а далее под него, и уж тем более плавая в фагоцитах по всему организму. Не нужны нам «африканские» схемы, мы же все-таки в более развитом обществе живем и нормальное, надеюсь, медицинское образование получаем, а потому способны объяснить, что раз пневмония или ангина за день не лечатся, то и с гонококком ровно та же история. Автор умышленно не будет писать никаких терапевтических схем, так как в базовых ситуациях они являются справочным материалом, а во всех остальных, коих большинство, персонифицированной медициной, опирающейся на результаты бактериологических исследований.
В заключение хотелось бы сказать, что хотя на улице и ковид, и иной раз даже у врачей создается впечатление, что ничем другим люди уже не болеют, но мы же понимаем, что это не так. И маски не носят, и точно так же барьерными методами защиты при половых актах не пользуются. Бессмертных Маклаудов оказалось намного больше, чем, например, автор еще совсем недавно подозревала, а потому гонококковые инфекции отнюдь не только проблема дерматовенерологов, с ней и к кардиологу, и к травматологу, да даже к клиническому фармакологу могут придти в любой момент, и основным и главным становится посыл пациента в правильном направлении, то есть в бак. лабораторию и к профильному специалисту. А в следующей статье будем вспоминать менингококк.
Источник
Гонококковая среда «СВГ»
Лабораторные методы широко применяются при диагностике заболеваний мочеполовой системы, передающихся половым путем: гонореи, сифилиса, трихомониаза и др. Наличие заболевания требует проведения мероприятий, призванных выявить причину инфекции.
Питательная среда «СВГ» предназначена для выделения и культивирования гонококков при исследовании материала от пациента. Каждый набор рассчитан на приготовление 110 мл гонококковой среды, готовой к применению.
Состав набора
Набор для получения питательной среды следует хранить при температуре 2 — 8 °С не более 12 месяцев. Плотная питательная среда может храниться в пробирках или чашках Петри не более 7 суток. В состав набора для приготовления питательной среды входит:
- основа: агар, дрожжевой экстракт, пептон, крахмал, соли;
- селективная добавка: коэнзимы, лизат эритроцитов, противогрибковые препараты, антибиотики, сахара;
- инструкция по использованию набора.
Методика проведения
Методика включает несколько этапов, каждый из которых должен проходить в соответствии с определёнными требованиями. По завершении всех стадий диагностики заболевания с помощью метода культивирования возбудителя на гонококковой среде производится учёт результатов через 24 часа, 48 часов и 72 часа. При острой гонорее отмечается рост гонококка в течение первых суток, при хронической — до 72 часов.
Приготовление раствора основы среды для культуральной диагностики осуществляется путём высыпания основы в ёмкость, содержащую дистиллированную воду (100 мл) для последующего набухания. Полученную суспензию помещают на водяную баню и периодически перемешивают до полного растворения основы, затем раствор кипятят в течение 2 минут. Раствор селективной добавки готовят ее растворением в дистиллированной воде (10 мл) при перемешивании.
Готовая питательная среда образуется при добавлении раствора селективной добавки к раствору основы. Полученную среду разливают в стерильные чашки Петри. Перед проведением исследования гонококковая среда должна быть выдержана в течение часа при температуре 37 °С. Затем производят посев материала в соответствии с приказом Минздрава «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».
Источник