Гельминтологическое исследование почвы это

Методика санитарно-гельминтологического исследования почвы.

1. Исследование почвы на яйца гельминтов.

Подготовка пробы к анализу.

Среднюю пробу почвы освобождают от посторонних включений; просеивают через сито с диаметром отверстий 2мм; измельчают в фарфоровой ступке с пестиком, обвязанный слоем резины. Подготовленную таким образом почву используют для дальнейшего анализа. Если требуется хранение почвы, измельченную пробу помещают в стеклянную банку, заливают 3% раствором формалина, приготовленного на физиологическом растворе( или 3% р-ра соляной кислоты), и хранят пробы при температуре 5-10С при частом перемешивании для аэрации(при таком хранении яйца гельминтов не развариваются).

Принцип метода основан на диспергировании почвы в растворе NaOH, флотации яиц гельминтов насыщенным раствором NaNO3 и дальнейшем микрокопировании поверхностной пленки флотоагента. Навеску 25,0 г почвы помещают в центрифужные пробирки объемом 250мл. и заливают 3%р-ом каливой или натриевой щелочью (соотношение1/2). Смесь тщательно размешивают при помощи электромешалки или стеклянных палочек в течении 5-8 мин и центрифугируют 5мин при 800 оборотов в минуту; надосадочную жидкость сливают, а почву промывают (от 1 до раз в зависимости от типа почвы) чистой водой до получения прозрачной надосадочной жидкости. После промывки к почве добавляют 150мл насыщенного раствора азотнокислого натрия ( уд. Вес 1,38-1,40), тщательно размешивают и центрифугируют . Пробирки устанавливают в штативе, доливают тем же раствором соли до уровня на 2-3мм ниже краев пробирки и покрывают предметными стеклами для снятия поверхностной пленки, концентрирующего яйца гельминтов.

При накрытие пробирок предметными стеклами оставляют с одного края пространство не более 10мм шириной, куда с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней поверхностью стекла. После этого предметное стекло осторожно передвигают до полного покрытия центрифужных пробирок. Через 20-25 мин. отстоя стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх.

К поверхностной пленке на предметных стеклах добавляют 3-4 капли 30% раствора глицерина, равномерно распределяют при помощи покровных стекол тонким слоем и микроскопируют, точно учитывая общее количество яиц гельминтов с обязательным соблюдением правильного и последовательного просмотра полей зрения. При необходимости приготовленные препараты можно хранить в холодильник до 5-7дней. При подсыхании препаратов по краям покровных стекол добавляют несколько капель 30% раствора глицерина.

Эффективность метода колеблется и зависит от типа обрабатываемой почвы, ее механического состава, содержания гумуса, илистых фракции, емкости поглощения.

2. Исследование почвы на личинки гельминтов (анкилостомидоз, стронкилоидоз).

Стеклянную воронку (диаметром 10-15см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой стеклянной пробиркой, устанавливают в штатив и наполняют водой (температура 45-50 градусов С). Почву в количестве 20-40 грамм на кусочке марли помещают на металлическую сетку, которую устанавливают на воронке так, чтобы нижняя часть почвы соприкасалась с водой. Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 С. Личинки в силу своей термотропности мигрируют из почвы через сито в воду и оседают на дно пробирки.

Источник

«МЕТОДЫ САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУК 4.2.796-99» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.12.99)

6.1. Исследование почвы

Подготовка к отбору проб. Отбор проб для паразитологических анализов проводят не менее 1 раза в год для оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения.

Для аналогичных исследований почв детских, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха отбор проб проводят не менее 2 раз в год — весной и осенью.

При изучении динамики самоочищения от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.

Для оценки качества по паразитологическим показателям почв сельскохозяйственных угодий, в зависимости от характера источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности на каждые 0,5 — 20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером 10 х 10 м; на территории расположения детских и лечебно-профилактических учреждений, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5 х 5 м.

Отбор проб почвы. Точечные пробы отбирают в соответствии с МУ 2.1.7.730-99 на модельной площадке из одного или нескольких слоев или горизонтов методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа.

Точечные пробы отбирают ножом, совком или шпателем из прикопок или почвенным буром Некрасова. Объединенную пробу составляют путем смешивания точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.

Для паразитологического анализа с каждой пробной площадки берут одну объединенную пробу массой 200 г, составленную из 10 точечных проб массой 20 г каждая, отобранных послойно с поверхности и глубины 10 — 20 см. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40 — 60 см) слоев почвы послойно. Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по предупреждению возможности их загрязнения.

Паразитологический анализ проб почвы проводят в день доставки их в лабораторию. При невозможности немедленного проведения исследований пробы почвы хранят в холодильнике при температуре до 5 °С. Для исследования на цисты кишечных патогенных простейших почву без обработки хранят не более 2 суток; на яйца биогельминтов — до 7 суток, а на яйца геогельминтов — не более 1 месяца.

Для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 часа при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник. При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают раствором формалина с массовой долей 3%, приготовленным на изотоническом растворе натрия хлористого с массовой долей 0,85% (жидкость Барбагалло), или раствором соляной кислоты с массовой долей 3%, а затем ставят в холодильник.

Подготовка проб почвы к анализу. Пробы почвы в лаборатории рассыпают на бумаге или кальке и разминают пестиком крупные комки. Затем из нее выбирают корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных, друзы гипса, известковые журавчики и др.

Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм.

ПОПРАВОЧНЫЕ КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИСТИННОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПОЧВ ЯЙЦАМИ АСКАРИД И ВЛАСОГЛАВОВ

Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхисов, клонорхисов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5%-ным раствором йодата калия.

Примечание. При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования:

1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол.

2. Обязательность контроля плотности насыщенного раствора с помощью ареометра (плотность должна быть не ниже 1,38 — 1,40).

В случае нарушения указанных требований в первом случае поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, во втором случае скорость всплывания яиц гельминтов замедлится и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки.

Для эффективного использования рабочего времени исследователя рекомендуется: во время первого отстаивания смеси «почва с щелочью» проводить подготовку предметных и покровных стекол, запись в журнале; во время второго — «почвы с насыщенным раствором соли» — подготовку рабочего места для микроскопирования, уборку центрифуги и другого лабораторного оборудования.

После окончания проведения анализов использованную посуду (центрифужные пробирки, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки) замачивают в стиральном порошке и кипятят 15 — 20 минут, затем моют в чистой воде.

Пробирки хранят в штативах, предметные и покровные стекла в широкогорлых банках с пробками, заполненных смесью Никифорова или нашатырным спиртом. Перед использованием предметные и покровные стекла не вытирают, а подсушивают.

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают в аппарат Бермана. Последний представляет собой стеклянную воронку (диаметром 10 — 15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой пробиркой. Систему устанавливают в штатив, наполняют теплой (температура 45 — 50 °С) водой, а затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой.

Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 °С. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки. Через 3 — 4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Но лучше содержимое пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок.

В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 °С) физраствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 минут жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под бинокулярным микроскопом МБС. По эффективности метод Супряги не уступает методу Бермана.

Для отличия личинок свободноживущих нематод от паразитических применяют метод Корта. Принцип его заключается в воздействии на личинок нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашку Петри или на часовое стекло. При добавлении 40%-ного раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5 — 8 минут, а паразитические — остаются живыми в течение 15 — 20 минут, но подвижность их замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1:25 первые гибнут через 12 минут, тогда как вторые в 95% случаев остаются нормально подвижны.

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой. Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 минут. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3 раз), собирая промывные воды в одном цилиндре. Промывные воды отстаивают, через 24 часа надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом. Микроскопируют не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на его общий объем. Анализ осадка проводят в течение первых 2 — 3 суток после его получения.

Для того, чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (до 2 месяцев), к нему добавляют консервант, содержащий мертиолят, 40%-ный раствор формалина, спирт этиловый 96° и физиологический раствор (соотношение компонентов в %: мертиолят — 0,0016 — 0,0018, 40%-ный формалин — 4,1 — 4,4; спирт этиловый 96° — 10,4 — 10,9; физиологический раствор — остальное). Консервант добавляют к осадку в соотношении 1:2 и хранят в холодильнике.

Для приготовления мазков каплю исследованной смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом красные.

Источник

Гельминтологический анализ почвы это…

Гельминтологический анализ почвы -— это достаточно важное мероприятие, которое выполняется в основном на государственном уровне. Множественные научно-экологические исследования, которые проводят квалифицированные ученые, доказывают, что наиболее загрязненной природной средой гельминтами считается почвенный покров.

Что представляют собой гельминты?

Гельминты — это паразиты, иными словами говоря — это черви, которые в основном живут в человеческом организме, а также в растениях и животных. Болезнь, которая была вызвана подобными паразитами, называется гельминтоз, данное заболевание считается наиболее распространенным в настоящее время. По словам специалистов, в человеческом организме присутствует достаточно большое количество подобных паразитов, приблизительно 300.

Каким образом выполняется загрязнение почвенного покрова яйцами гельминтов?

Как правило, все зависит от того, как оборудованы дома и села в соблюдении санитарно-гигиенических норм, то есть, имеется ли туалет, канализационные стоки и как часто происходит плановое очищение. Также, какое количество людей уже есть зараженных, эффективность методов очистки, санитарная культура и прочее другое.

В настоящее время загрязнение почвенного покрова яйцами гельминтов достаточно распространено, именно поэтому выполнять подобного рода проверки почвы на обнаружение гельминтов считается необходимым процессом.

Существует множество центров, которые выполняют подобного рода проверки под наблюдением квалифицированных экспертов. Данные учреждения в основном имеют в наличии современные лабораторные условия и качественное оборудование, благодаря которым можно по окончанию исследования получить грамотное экспертное заключение, имеющее юридическую силу.

Источник