Гост р 54653 2011 удобрения органические методы микробиологического анализа

Гост р 54653 2011 удобрения органические методы микробиологического анализа

ГОСТ Р 54653-2011

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Методы микробиологического анализа

Organic fertilizers. Methods of microbiological analysis

Дата введения 2013-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт органических удобрений и торфа» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИИОУ» Россельхозакадемии) и Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИИСХМ» Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 025 «Качество почв, грунтов и органических удобрений»

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2020 г.

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на органические удобрения и устанавливает методы микробиологического анализа.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 61 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 83 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия

ГОСТ 171 Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия

ГОСТ 245 Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия

ГОСТ 427 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 435 Реактивы. Марганец (II) сернокислый 5-водный. Технические условия

ГОСТ 450 Кальций хлористый технический. Технические условия

ГОСТ 480 Пластины асбестоцеллюлозные фильтрующие и стерилизующие. Технические условия

ГОСТ 490 Кислота молочная пищевая. Технические условия

ГОСТ 828 Натрий азотнокислый технический. Технические условия

ГОСТ 1341 Пергамент растительный. Технические условия

ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 1820 Спички. Технические условия

ГОСТ 2156 Натрий двууглекислый. Технические условия

ГОСТ 2493 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия

ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3145 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 3652 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3758 Реактивы. Алюминий сернокислый 18-водный. Технические условия

ГОСТ 3760 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 3769 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 3773 Реактивы. Аммоний хлористый. Технические условия

ГОСТ 4144 Реактивы. Калий азотистокислый. Технические условия

ГОСТ 4145 Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4147 Реактивы. Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия

ГОСТ 4148 Реактивы. Железо (II) сернокислое 7-водное. Технические условия

ГОСТ 4165 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4174 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4198 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 4217 Реактивы. Калий азотнокислый. Технические условия

ГОСТ 4232 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия

ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4234 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия

ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4517 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 4523 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4529 Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия

ГОСТ 4530 Реактивы. Кальций углекислый. Технические условия

ГОСТ 4919.1 Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов

ГОСТ 5538 Реактивы. Калий лимоннокислый 1-водный. Технические условия

ГОСТ 5556 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5821 Реактивы. Кислота сульфаниловая. Технические условия

ГОСТ 5833 Реактивы. Сахароза. Технические условия

ГОСТ 5845 Реактивы. Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия

ГОСТ 6038 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия

ГОСТ 6259 Реактивы. Глицерин. Технические условия

ГОСТ 6419 Реактивы. Магний углекислый основной водный. Технические условия

ГОСТ 6672 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6691 Реактивы. Карбамид. Технические условия

ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 8253 Мел химический осажденный. Технические условия

ГОСТ 9147 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9284 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 9412 Марля медицинская. Общие технические условия

ГОСТ 9656 Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 9871 Термометры стеклянные ртутные электроконтактные и терморегуляторы. Технические условия

ГОСТ 10163 Реактивы. Крахмал растворимый. Технические условия

ГОСТ 10354 Пленка полиэтиленовая. Технические условия

ГОСТ 10444.1 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 10929 Реактивы. Водорода пероксид. Технические условия

ГОСТ 10931 Реактивы. Натрий молибденовокислый 2-водный. Технические условия

ГОСТ ISO 11133-1 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

Действует ГОСТ ISO 11133-2016 «Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред».

ГОСТ ISO 11133-2 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

Действует ГОСТ ISO 11133-2016 «Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление, производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред».

ГОСТ 12026 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13805 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия

ГОСТ 14919 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

Источник

ГОСТ Р 54653-2011
Удобрения органические. Методы микробиологического анализа

Купить ГОСТ Р 54653-2011 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО «ЦНТИ Нормоконтроль»

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

• Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
• Курьерская доставка (7 дней)
• Самовывоз из московского офиса
• Почта РФ

Распространяется на органические удобрения и устанавливает методы микробиологического анализа.

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Общие положения

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, культуральные среды, посуда, материалы

6 Приготовление среди реактивов

7 Отбор и подготовка проб

8 Подготовка к проведению анализа

9 Методы микробиологического анализа органических удобрений

Приложение А (справочное) Состав дезинфицирующих растворов

Приложение Б (справочное) Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов

Приложение В (справочное) Зависимость продолжительности стерилизации жидкостей от объема сосудов

Приложение Г (справочное) Схема приготовления разведений и посева суспензии микроорганизмов шпателем

Приложение Д (справочное) Экспресс-обработка результатов учета микроорганизмов по методу предельных разведений (таблица Мак-Креди)

Приложение Е (справочное) Схема оценки микробиологических характеристик органических удобрений

Этот ГОСТ находится в:

• Раздел Автомобильные дороги
  • Раздел 2 Экологические разделы проектной документации
    • Раздел 1. Реконструкция и строительство
      • Раздел 3. Качество воды
        • Раздел 3.3. Сточные воды

Организации:

Organic fertilizers. Methods of microbiological analysis

• ГОСТ Р 54519-2011Удобрения органические. Методы отбора проб. Заменен на ГОСТ Р 58487-2019.
• ГОСТ Р 12.1.019-2009Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
• ГОСТ Р 53228-2008Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
• ГОСТ Р 53042-2008Удобрения органические. Термины и определения
• ГОСТ 490-2006Добавки пищевые. Кислота молочная Е270. Технические условия
• ГОСТ Р ИСО 10576-1-2006Статистические методы. Руководство по оценке соответствия установленным требованиям. Часть 1. Общие принципы
• ГОСТ Р 52361-2005Контроль объекта аналитический. Термины и определения. Заменен на ГОСТ Р 52361-2018.
• ГОСТ Р 51652-2000Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
• ГОСТ Р 51935-2002Стерилизаторы паровые большие. Общие технические требования и методы испытаний
• ГОСТ 1820-2001Спички. Технические условия
• ГОСТ Р 51564-2000Аппараты и установки сушильные и выпарные. Требования безопасности. Методы испытаний
• ГОСТ Р 50962-96Посуда и изделия хозяйственного назначения из пластмасс. Общие технические условия
• ГОСТ 9871-75Термометры стеклянные ртутные электроконтактные и терморегуляторы. Технические условия
• ГОСТ 9656-75Реактивы. Кислота борная. Технические условия
• ГОСТ 9412-93Марля медицинская. Общие технические условия
• ГОСТ 9284-75Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
• ГОСТ 9147-80Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
• ГОСТ 83-79Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
• ГОСТ 828-77Натрий азотнокислый технический. Технические условия
• ГОСТ 8253-79Мел химически осажденный. Технические условия
• ГОСТ 6691-77Реактивы. Карбамид. Технические условия
• ГОСТ 6672-75Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
• ГОСТ 6419-78Реактивы. Магний углекислый основной водный. Технические условия
• ГОСТ 6259-75Реактивы. Глицерин. Технические условия
• ГОСТ 61-75Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
• ГОСТ 6038-79Реактивы. D-глюкоза. Технические условия
• ГОСТ 5845-79Реактивы. Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия
• ГОСТ 5833-75Реактивы. Сахароза. Технические условия
• ГОСТ 5821-78Реактивы. Кислота сульфаниловая. Технические условия
• ГОСТ 5556-81Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия
• ГОСТ 5538-78Реактивы. Калий лимоннокислый 1-водный. Технические условия
• ГОСТ 4919.1-77Реактивы и особо чистые вещества. Методы приготовления растворов индикаторов. Заменен на ГОСТ 4919.1-2016.
• ГОСТ 480-78Пластины асбестоцеллюлозные фильтрующие и стерилизующие. Технические условия
• ГОСТ 4529-78Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия
• ГОСТ 4523-77Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия
• ГОСТ 4517-87Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе. Заменен на ГОСТ 4517-2016.
• ГОСТ 435-77Реактивы. Марганец (II) сернокислый 5-водный. Технические условия
• ГОСТ 4328-77Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
• ГОСТ 4234-77Реактивы. Калий хлористый. Технические условия
• ГОСТ 4232-74Реактивы. Калий йодистый. Технические условия
• ГОСТ 4217-77Реактивы. Калий азотнокислый. Технические условия
• ГОСТ 4198-75Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия
• ГОСТ 4174-77Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия
• ГОСТ 4165-78Реактивы. Медь II сернокислая 5-водная. Технические условия
• ГОСТ 4148-78Реактивы. Железо (II) серно-кислое 7-водное. Технические условия
• ГОСТ 4147-74Реактивы. Железо (III) хлорид 6-водный. Технические условия
• ГОСТ 4145-74Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия
• ГОСТ 4144-79Реактивы. Калий азотистокислый. Технические условия
• ГОСТ 3773-72Реактивы. Аммоний хлористый. Технические условия
• ГОСТ 3769-78Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия
• ГОСТ 3760-79Реактивы. Аммиак водный. Технические условия
• ГОСТ 3758-75Реактивы. Алюминий сернокислый 18-водный. Технические условия
• ГОСТ 3652-69Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия
• ГОСТ 3145-84Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
• ГОСТ 3118-77Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
• ГОСТ 29251-91Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
• ГОСТ 29227-91Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
• ГОСТ 29112-91Среды питательные плотные (для ветеринарных целей). Общие технические условия
• ГОСТ 27068-86Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия
• ГОСТ 25706-83Лупы. Типы, основные параметры. Общие технические требования
• ГОСТ 25336-82Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
• ГОСТ 2493-75Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия
• ГОСТ 245-76Реактивы. Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия
• ГОСТ 24363-80Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия
• ГОСТ 22649-83Стерилизаторы воздушные медицинские. Общие технические условия
• ГОСТ 22280-76Реактивы. Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия
• ГОСТ 2156-76Натрий двууглекислый. Технические условия
• ГОСТ 21241-89Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний
• ГОСТ 21239-93Инструменты хирургические. Ножницы. Общие требования и методы испытаний
• ГОСТ 20730-75Питательные среды. Бульон мясо-пептонный (для ветеринарных целей). Технические условия
• ГОСТ 20083-74Дрожжи кормовые. Технические условия
• ГОСТ 19906-74Нитрит натрия технический. Технические условия
• ГОСТ 19881-74Анализаторы потенциометрические для контроля рН молока и молочных продуктов. Общие технические условия
• ГОСТ 19808-86Стекло медицинское. Марки
• ГОСТ 19126-79Инструменты медицинские металлические. Общие технические условия. Заменен на ГОСТ 19126-2007.
• ГОСТ 17811-78Мешки полиэтиленовые для химической продукции. Технические условия
• ГОСТ 1770-74Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
• ГОСТ 17626-81Казеин технический. Технические условия
• ГОСТ 171-81Дрожжи хлебопекарные прессованные. Технические условия
• ГОСТ 17151-81Посуда хозяйственная из листового алюминия. Общие технические условия. Заменен на ГОСТ 17151-2019.
• ГОСТ 16317-87Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
• ГОСТ 15530-93Парусины и двунитки. Общие технические условия
• ГОСТ 14919-83Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
• ГОСТ 13805-76Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия
• ГОСТ 1341-97Пергамент растительный. Технические условия. Заменен на ГОСТ 1341-2018.
• ГОСТ 12026-76Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
• ГОСТ 10931-74Реактивы. Натрий молибденовокислый 2-водный. Технические условия
• ГОСТ 10929-76Реактивы. Водорода пероксид. Технические условия
• ГОСТ 10444.1-84Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
• ГОСТ 1027-67Реактивы. Свинец (II) уксуснокислый 3-водный. Технические условия
• ГОСТ 10163-76Реактивы. Крахмал растворимый. Технические условия
• ГОСТ 6709-72Вода дистиллированная. Технические условия
• ГОСТ 4233-77Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
• ГОСТ 450-77Кальций хлористый технический. Технические условия
• ГОСТ 28498-90Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
• ГОСТ 17308-88Шпагаты. Технические условия
• ГОСТ 23932-90Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия
• ГОСТ 427-75Линейки измерительные металлические. Технические условия
• ГОСТ 10354-82Пленка полиэтиленовая. Технические условия
• ГОСТ Р 51232-98Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля качества
• ГОСТ 18963-73Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа
• ГОСТ 12.1.007-76Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
• ГОСТ 12.1.004-91Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
• Показать все

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

УДОБРЕНИЯ ОРГАНИЧЕСКИЕ Методы микробиологического анализа

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 года № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт органических удобрений и торфа» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИИОУ» Россельхозакадемии) и Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК25 «Качество почв, грунтов и органических удобрений»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. №802-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

5.3 При проведении микробиологических анализов органических удобрений используют следующие культуральные среды:

— автолизат кормовых дрожжей;

— агар микробиологический по ГОСТ 17206;

— агар питательный сухой;

— бульон мясо-пептонный по ГОСТ20730.

5.4 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и вспомогательного оборудования с техническими характеристиками, а также материалов, реактивов, культуральных сред, по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Приготовление сред и реактивов

6.1 Питательные среды приготавливают и стерилизуют в соответствии с требованиями ГОСТ ISO 11133-1, ГОСТ ISO 11133-2.

6.2 Питательный агар из сухого препарата промышленного производства по ГОСТ 17206 готовят по способу, указанному на этикетке в соответствии с ГОСТ 10444.1.

6.3 Мясо-пептонный агар (МПА) готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1.

6.4 Мясо-пептонный бульон (МПБ) по ГОСТ 20730, ГОСТ 29112 готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1.

6.5 Вода пептонная

Состав (в граммах на 1 дм 3 водопроводной воды): пептон — 5,0; К₂НР0₄— 1,0; КН₂Р0₄— 1,0; MgS0₄ 7H₂0 — 0,5; NaCI — 0,5.

В термостойкую плоскодонную либо коническую колбу по ГОСТ 25336 помещают 1 дм 3 водопроводной воды, вносят 5 г пептона и кипятят в течение 15 мин. В горячую жидкость вносят соли. Доводят pH до 7,0 по ГОСТ 10444.1. После растворения солей раствор тщательно взбалтывают и фильтруют до полной прозрачности. Фильтрат собирают в коническую колбу, химический стакан по ГОСТ 25336.

Среду разливают в пробирки по 6 см 3 и стерилизуют в автоклаве в течение 25 мин при давлении

Срок хранения среды — не более 2 мес; в холодильнике — не более 5 дней.

6.6 Среда Федорова

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): Кили Na — виннокислый или Na яблочнокислый — 5,0; мочевина — 50,0; К₂НР0₄ — 0,5; MgS0₄-7H₂0 — 0,2.

В термостойкую плоскодонную либо коническую колбу по ГОСТ 25336 помещают 1 дм 3 водопроводной воды. Вносят соли, кроме мочевины. Среду стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С, давлении 101,3 кПа в течение 20 мин. В стерильную среду добавляют раствор мочевины, предварительно пропущенный через бактериальный фильтр. Среду разливают по 30 см 3 в конические колбы.

Срок хранения среды — не более 3 мес; в холодильнике — не более 7 дней.

6.7 Среда Зенгена

Состав (в граммах на 1 дм 3 водопроводной воды): мочевина — 30; К₂НР0₄ — 0,5; лимоннокислый кальций — 10. pH среды — около 7,0.

Среду стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С, давлении 101,3 кПа в течение 20 мин. Мочевину стерилизуют отдельно сухим жаром при температуре 106 °С в течение 30 мин и затем вводят в стерильную среду.

Срок хранения среды — не более 3 мес; в холодильнике — не более 7 дней.

6.8 Агар крахмало-аммиачный (КАА)

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): (NH₄)₂S0₄ — 2,0; К₂НР0₄—1,0; MgS0₄-7H₂0 — 1,0; NaCI — 1,0; СаС0₃ — 3,0; крахмал растворимый — 10,0; агар — 20,0.

Крахмал предварительно растворяют в 50 см 3 дистиллированной воды и приливают к основной среде до стерилизации. Среду стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С, давлении 101,3 кПа в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 3 мес; в холодильнике — не более 7 дней.

6.9 Среда крахмало-казеиновая

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): крахмал растворимый — 10,0; казеин — 0,3; KN0₃—2,0; К₂НР0₄ —2,0; MgS0₄ • 7Н₂0 —0,05; NaCI —2,0; СаС0₃ —0,02; FeS0₄ • 7Н₂0 —0,01; агар — 20,0.

ГОСТ Р 54653-2011

Среду стерилизуют в автоклаве при температуре 111 °С, давлении 50,7 кПа в течение 20 мин. Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 7 дней.

6.10 Агар глицерино-аргининовый

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): глицерин —12,5; аргинин —1,0; К₂НР0₄—1,0; MgS0₄-7H₂0 —0,05; NaCI — 1,0; FeS0₄ • 7Н₂0 — 0,01; CuS0₄ • 5Н₂0 — 0,001;

Среду стерилизуют в автоклаве при температуре 111 °С, давлении 50,7 кПа в течение 20 мин. Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 7 дней.

6.11 Сусло-агар

Семибаллинговое сусло разводят дистиллированной водой в соотношении 1:3 и добавляют 2 %-ный агар. Среду стерилизуют при давлении 50,7 кПа в течение 30 мин. Перед посевом в 1 дм 3 среды добавляют 2 см 3 стерильной молочной кислоты или 0,5 г стерильной лимонной кислоты.

Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 5 дней.

6.12 Среда Чапека

Состав (в граммахна 1 дм 3 дистиллированнойводы): NaN0₃ — 2,0; К₂НР0₄ — 1,0; MgS0₄— 7Н₂0 — 0,5; KCI — 0,5; FeS0₄ — следы; сахароза — 20,0; агар — 20,0.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 30 мин. Перед посевом в 1 дм 3 среды добавляют 4 см 3 стерильной молочной кислоты.

Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 5 дней.

6.13 Среда Мартина

Состав (в граммах на 1 дм 3 водопроводной воды): К₂НР0₄—1,0; MgS0₄ • 7Н₂0 — 0,5; пептон — 5,0; глюкоза — 10,0; бенгальский розовый — 0,15 мг; агар — 20,0.

Среду стерилизуют при давлении 50,7 кПа в течение 30 мин.

После стерилизации перед разливом в расплавленную среду вносят стрептомицин 0,5 г/дм 3 . Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 5 дней.

6.14 Среда Гетчинсона

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): К₂НР0₄— 1,0; MgS0₄—0,3; СаС1₂—0,1; NaCI — 0,1; FeCI₃ — 0,01; NaN0₃ — 2,5; агар — 20,0. pH среды — 7,2—7,3.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа при температуре 120 °С в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 7 дней.

6.15 Среда Виноградского

Состав (в граммах на 1 дм 3 водопроводной воды): К₂НР0₄ —1,0; (NH₄)₂S0₄—1,0; MgS0₄-7H₂0 — 0,5; NaCI — 0,5; агар — 20,0.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа при температуре 120 °С в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 2 мес; вхолодильнике—не более 5 дней.

6.16 Среда Омелянского

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): К₂НР0₄—1,0; MgS0₄ • 7Н₂0—1,0; NaCI — 1,0; (NH₄)₂S0₄ — 2,0; СаС0₃ — 2,0; фильтровальная бумага — 30,0.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 7 дней.

6.17 Среда жидкая Виноградского

Состав среды для второй фазы в процентах: NaN0₂—0,1; Na₂C0₃ (безводный) — 0,1; NaCI — 0,05; К₂НР0₄ — 0,05; MgS0₄ • 7Н₂0 — 0,05; FeS0₄ • 7Н₂0 — 0,04.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 2 мес; вхолодильнике — не более 5 дней.

6.18 Среда для учета гетеротрофных нитрификаторов

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): сухой питательный агар — 3,5; агар — 13,5; (NH₄)₂S0₄ — 0,5. pH среды — 7,0—7,2.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 7 дней.

6.19 Жидкая среда Гильтая

Готовят два раствора.

Первый раствор: 2,0 rKN0₃,1,0 г аспарагина растворяют в 250 см 3 дистиллированной воды. Второй раствор: 5 г натрия лимоннокислого, 2,0 г КН₂Р0₄, 2,0 г MgS0₄ • 7Н₂0, 0,2 г СаС1₂ • 6Н₂0 и FeCI₃‘6H₂0 (следы) растворяют в 500 см 3 дистиллированной воды.

Оба раствора сливают в коническую колбу по ГОСТ 25336 и доводят объем среды до 1000 см 3 . Устанавливают pH 7 по индикатору бромтимоловому синему, который добавляют в среду. Цвет среды зеленый. Среду разливают высоким слоем (до 2/3 объема) по пробиркам и стерилизуют в автоклаве при давлении 50,7 кПа, температуре 112 °С в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 2 мес; в холодильнике — не более 5 дней.

6.20 Среда Березовой

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): цитрат калия или натрия — 2,0; KN0₃ — 1,0; КН₂Р0₄ — 1,0; К₂НР0₄ — 1,0; MgS0₄ • 7Н₂0 — 2,0 г; СаС1₂ • 6Н₂0 — 0,2г; FeCI₃ • 6Н₂0 — следы (1 см 3 1 %-ного раствора на 1 дм 3 среды).

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 20 мин.

Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 10 дней.

6.21 Агар нитритный, приготовленный по методу Виноградского

Состав среды (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): NaN0₂ —1,0; Na₂C0₃ (безводный) — 1,0; NaCI — 0,5; К₂НР0₄ — 0,5; MgS0₄-7H₂0 — 0,5; FeS0₄-7H₂0 — 0,4; агар — 20 г.

Среду стерилизуют при давлении 50,7 кПа в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 10 дней.

6.22 Среда синтетическая безазотистая

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): сахароза — 20,0; К₂НР0₄ —1,0; MgS0₄ 7H₂0 — 0,5; NaCI, FeS0₄, MnS0₄ — следы.

Среду стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 20 мин. Перед посевом добавляют 1 см 3 стерильной дрожжевой воды и 20 г стерильного мела.

Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 10 дней.

6.23 Среда Емцева

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): NaH₂P0₄ — 0,5; KgHPC^ — 0,5; MgS0₄ • 7Н₂0 — 0,5; NaCI —0,5; FeS0₄ • 7Н₂0 — 0,01; MnS0₄-4H₂0 —0,01; глюкоза — 20,0;

мел — 10,0; смесь микроэлементов по Федорову—1,0 см 3 ; пептон — 5,0; дрожжевой автолизат — 0,2 см 3 . pH среды — 7,0.

Среду стерилизуют при давлении 50,7 кПа в течение 20 мин.

Срок хранения среды — не более 3 мес; в холодильнике — не более 7 дней.

6.24 Среда жидкая Бейеринка

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): маннит или Д-глюкоза — 20,0; К₂НР0₄— 0,2; СаС0₃ — 5,0; MgS0₄ -7H₂0 — 0,2; 1 см 3 смеси микроэлементов по Федорову.

Среду стерилизуют при давлении 50,7 кПа в течение 20 мин.

Срок хранения среды — не более 2 мес; вхолодильнике — не более 5 дней.

6.25 Среда плотная Эшби

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): маннит — 20,0; К₂НР0₄—0,2; MgS0₄ • 7Н₂0 — 0,2; NaCI — 0,2; K₂S0₄ — 0,1; CaCO_s — 5,0; смесь микроэлементов по Федорову — 1 см 3 ; агар — 20,0 г.

Среду стерилизуют при давлении 50,7 кПа в течение 30 мин.

Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 10 дней.

6.26 Реактив Несслера — по ГОСТ 4517.

Срок хранения среды — не более 6 мес; вхолодильнике — не более 10 дней.

6.27 РастворЛюголя — поГОСТ 10444.1.

6.28 Цинк-йод-крахмал — по ГОСТ4517.

6.29 Состав микроэлементов по Федорову

Срок хранения среды —не более 2 мес; вхолодильнике — не более 5 дней.

ГОСТ Р 54653-2011

6.30 Вода дрожжевая

100 г дрожжей растворяют в 1 дм 3 воды, кипятят 10 мин, фильтруют, стерилизуют при давлении

50,7 кПа в течение 10 мин. После стерилизации в среду добавляют 20 г стерильного мела на 1 дм 3 среды. Мел стерилизуют при давлении 101,3 кПа в течение 20 мин.

Срок хранения среды — не более 2 мес; в холодильнике — не более 5 дней.

Примечание — Все используемые среды хранят в сухих, защищенных от прямого солнечного света помещениях при температуре от 2 °С до 25 °С в специальных для стерилизации и хранения питательных сред широко-горлых колбах из термостойкого стекла вместимостью 500 см 3 с герметично завинчивающимися крышками либо в холодильнике в колбах, снабженных ватными пробками, при температуре от 2 °С до 5 °С.

6.31 Бромтимоловый синий — по ГОСТ4919.1, ГОСТ 10444.1.

6.32 Соль аммонийно-магниево-фосфорнокислая

Готовят два раствора.

Первый раствор: в 200 см 3 дистиллированной воды растворяют 25,0 г хлористого аммония (NH₄CI) и 20 г сернокислого магния (MgS0₄ • 7Н₄0).

Второй раствор: в 100 см 3 дистиллированной воды растворяют 10 г однозамещенного фосфорнокислого натрия (NaH₂P0₄).

Оба раствора смешивают и прибавляют 20 см 3 насыщенного хлористого аммония. Прибавляют по каплям концентрированный аммиак до образования сильного устойчивого запаха. Через 10 мин фильтруют через бумажный фильтр, промывают дистиллированной водой до исчезновения запаха. Высушивают на воздухе и аммонийно-магниево-фосфорнокислую соль развешивают в пакетики по 0,8 г.

6.33 Реактив Грисса — по ГОСТ 4517 со следующим дополнением.

Первый раствор состоит из 0,5 г сульфаниловой кислоты, растворенной в 30 см 3 ледяной уксусной кислоты. Добавляют 100 см 3 дистиллированной воды и фильтруют.

Срок хранения раствора в холодильнике при 4 °С — 5 °С — не более одного месяца.

Второй раствор: 0,1 г а-нафтиламина растворяют в 100 см 3 кипящей дистиллированной воды. Охлаждают и добавляют 30 см 3 ледяной уксусной кислоты. Раствор фильтруют.

Срок хранения раствора в холодильнике при 4 °С — 5 °С — не более одной недели.

Непосредственно перед употреблением смешивают равные объемы данных растворов.

6.34 Приготовление стерильной воды — по ГОСТ 18963.

6.35 Приготовление стерильного кальция углекислого — поГОСТ 10444.1.

6.36 Водный агар

Состав (в граммах на 1 дм 3 дистиллированной воды): агар — 20,0.

В термостойкую плоскодонную либо коническую колбу по ГОСТ 25336 помещают 1 дм 3 водопроводной воды, вносят 20 г микробиологического агар-агара.

Среду стерилизуют 30 мин в автоклаве при температуре 120 °С, давлении 101,3 кПа.

Срок хранения среды — не более 3 мес; вхолодильнике — не более 7 дней.

7 Отбор и подготовка проб

Отбор проб органических удобрений — по ГОСТ Р 54519.

8 Подготовка к проведению анализа

8.1 Подготовку лабораторных помещений, стерилизацию посуды, инструментов, питательных сред, физиологических растворов проводят по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ ISO 11133-1, ГОСТ ISO 11133-2.

Длительность и температура стерилизации определяются составом питательной среды, химическим составом материала и целью анализа (см. приложения Б, В).

8.2 Приготовление разведений, посев и учет микроорганизмов

8.2.1 Лабораторную пробу твердых органических удобрений из пакета выкладывают на стерильную полиэтиленовую пленку, тщательно перемешивают шпателем, удаляя при этом посторонние включения (камни, стекла и т.д.), разравнивают тонким слоем и из разных мест отбирают 10 г анализируемой пробы. При анализе жидких или полужидких органических удобрений лабораторную пробу тщательно перемешивают и отбирают 10 см 3 пробы для анализа.

8.2.2 Анализируемую пробу переносят в колбу со 100 см 3 стерильной водопроводной воды. Параллельно отбирают анализируемые пробы для определения влажности в металлические или стек-

лянные бюксы. Колбы с органическим удобрением помещают на механическую качалку и встряхивают в течение 15 мин, предварительно заменив ватные пробки на резиновые. Поокончании встряхивания приступают к проведению микробиологического анализа, который включает: приготовление разведений, проведение посева и учет количества колоний.

8.2.3 Разведение готовят в стерильной водопроводной воде или в физиологическом растворе (0,85 %-ный раствор NaCI по ГОСТ 4233), используя постоянный коэффициент разведения, чаще всего равный 10. Разведение осуществляют в ряде пробирок, содержащих по 9 см 3 воды.

Количество разведений подбирается опытным путем с учетом вида органического удобрения. Колбу с суспензией встряхивают и оставляют на 30 сек для оседания крупных частиц. Стерильной пипеткой отбирают 1 см 3 суспензии (не прикасаясь ко дну колбы), переносят ее в пробирку с водой (9 см 3 ). Суспензию в первой пробирке тщательно перемешивают другой стерильной пипеткой, для чего в пипетку забирают и вновь возвращают в пробирку ее содержимое. Данная операция по перемешиванию суспензии микроорганизмов повторяется не менее 10 раз. Аналогичным образом готовят все последующие разведения, 1 см 3 суспензии в колбе соответствует разведению 10 -1 , в первой пробирке — 10

2 и так далее. Пробирки и колбы обычно подписывают заранее двумя цифрами, написанными одна под другой. Верхняя цифра обозначает номер образца, нижняя — степень разведения (см. приложение Г).

8.2.4 При планировании посева на большое количество питательных сред 9 см 3 суспензии будет недостаточно. В этом случае ряд разведений готовят в колбах или бутылках вместимостью 250 см 3 с 90 см 3 стерильной водопроводной воды. Из первой и последующих колб берут по 10 см 3 суспензии. Для приготовления каждого разведения используют новую пипетку. Бутылки встряхивают 1 мин. Использованные пипетки помещают в фарфоровую кружку, на дно которой кладут вату и наливают немного воды. Все операции проводят при зажженной газовой горелке или спиртовке.

8.2.5 Высевают суспензию поверхностным или глубинным способом на плотные и жидкие питательные среды. Посев проводят в боксах, ламинарных шкафах, оборудованных ультрафиолетовыми лампами, с соблюдением условий асептики. Набор сред зависит от задач бактериологического анализа органических удобрений. Расплавленную и охлажденную до температуры 45 °С — 50 °С агаризованную среду разливают в чашки Петри по 15—20 см 3 в каждую.

Чашки должны находиться на горизонтальной поверхности, чтобы получился ровный слой застывшей среды. Чашки помещают в предварительно протертый 70 %-ным этиловым спиртом и нагретый до температуры 65 °С —70 °С сушильный шкаф на 15 — 20 мин. В сушильном шкафу чашки Петри переворачивают вверх дном, открывают и ставят под углом 45° на крышку и подсушивают для удаления конденсационной воды до появления муарового рисунка на поверхности среды. Развившиеся колонии микроорганизмов на таких чашках не расплываются и не сольются друг с другом.

Тщательно перемешав суспензию в пробирке или бутылке, стерильной пипеткой на поверхность среды наносят точно измеренный объем (0,05 или 0,1 см 3 ) соответствующего разведения, затем быстро и тщательно растирают его стерильным стеклянным шпателем по всей поверхности среды. Посев обычно осуществляют из двух или трех последовательных разведений в целях проведения более точного подсчета количества микроорганизмов в органическом удобрении. Из каждого разведения засевают по три — пять параллельных чашек. Для каждого разведения используют новый стерильный шпатель. После посева чашки переворачивают крышками вниз и инкубируют в термостате при определенной температуре необходимое время.

8.2.6 При глубинном посеве 0,5 или 1 см 3 суспензии из соответствующего разведения переносят пипеткой в три—пять стерильных чашек Петри, затем заливают расплавленной и охлажденной до температуры 45 °С — 50 °С средой и смешивают с посевным материалом легким вращательным движением. После застывания чашки помещают в термостат.

8.2.7 После прохождения необходимого срока инкубации чашки вынимают из термостата и подсчитывают число выросших колоний. Для правильного определения численности клеток подсчитывают только такие чашки, в которых выросло колоний свыше десяти и не более 250—300. Закрытые чашки просматривают в проходящем свете и отмечают колонии тушью или маркером по стеклу. Для удобства дно чашки с помощью линейки и маркера делят на секторы. Подсчет колоний на непрозрачных средах (почвенный агар) проводят непосредственно с поверхности. Для подсчета колоний используют специальные полуавтоматические счетчики. Чтобы не пропустить мелкие колонии, чашки дополнительно просматривают под лупой.

8.2.8 Все количественные подсчеты на агаризованных средах необходимо проводить всегда через одно и то же время после посева, чтобы получить сравнимые результаты.

ГОСТ Р 54653-2011

Количество клеток М, в 1 см 3 анализируемого субстрата, вычисляют по формуле

Источник