Методика санитарно-гельминтологического исследования почвы.
1. Исследование почвы на яйца гельминтов.
Подготовка пробы к анализу.
Среднюю пробу почвы освобождают от посторонних включений; просеивают через сито с диаметром отверстий 2мм; измельчают в фарфоровой ступке с пестиком, обвязанный слоем резины. Подготовленную таким образом почву используют для дальнейшего анализа. Если требуется хранение почвы, измельченную пробу помещают в стеклянную банку, заливают 3% раствором формалина, приготовленного на физиологическом растворе( или 3% р-ра соляной кислоты), и хранят пробы при температуре 5-10С при частом перемешивании для аэрации(при таком хранении яйца гельминтов не развариваются).
Принцип метода основан на диспергировании почвы в растворе NaOH, флотации яиц гельминтов насыщенным раствором NaNO3 и дальнейшем микрокопировании поверхностной пленки флотоагента. Навеску 25,0 г почвы помещают в центрифужные пробирки объемом 250мл. и заливают 3%р-ом каливой или натриевой щелочью (соотношение1/2). Смесь тщательно размешивают при помощи электромешалки или стеклянных палочек в течении 5-8 мин и центрифугируют 5мин при 800 оборотов в минуту; надосадочную жидкость сливают, а почву промывают (от 1 до раз в зависимости от типа почвы) чистой водой до получения прозрачной надосадочной жидкости. После промывки к почве добавляют 150мл насыщенного раствора азотнокислого натрия ( уд. Вес 1,38-1,40), тщательно размешивают и центрифугируют . Пробирки устанавливают в штативе, доливают тем же раствором соли до уровня на 2-3мм ниже краев пробирки и покрывают предметными стеклами для снятия поверхностной пленки, концентрирующего яйца гельминтов.
При накрытие пробирок предметными стеклами оставляют с одного края пространство не более 10мм шириной, куда с помощью пипетки вносят насыщенный раствор соли до его соприкосновения с нижней поверхностью стекла. После этого предметное стекло осторожно передвигают до полного покрытия центрифужных пробирок. Через 20-25 мин. отстоя стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх.
К поверхностной пленке на предметных стеклах добавляют 3-4 капли 30% раствора глицерина, равномерно распределяют при помощи покровных стекол тонким слоем и микроскопируют, точно учитывая общее количество яиц гельминтов с обязательным соблюдением правильного и последовательного просмотра полей зрения. При необходимости приготовленные препараты можно хранить в холодильник до 5-7дней. При подсыхании препаратов по краям покровных стекол добавляют несколько капель 30% раствора глицерина.
Эффективность метода колеблется и зависит от типа обрабатываемой почвы, ее механического состава, содержания гумуса, илистых фракции, емкости поглощения.
2. Исследование почвы на личинки гельминтов (анкилостомидоз, стронкилоидоз).
Стеклянную воронку (диаметром 10-15см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой стеклянной пробиркой, устанавливают в штатив и наполняют водой (температура 45-50 градусов С). Почву в количестве 20-40 грамм на кусочке марли помещают на металлическую сетку, которую устанавливают на воронке так, чтобы нижняя часть почвы соприкасалась с водой. Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 С. Личинки в силу своей термотропности мигрируют из почвы через сито в воду и оседают на дно пробирки.
Источник
О санитарно-паразитологических исследованиях почвы
Почва является одним из факторов передачи возбудителей паразитарных заболеваний (гельминтозов и протозоозов) у человека. Гельминтозы, передающиеся через почву (геогельминтозы), входят в число наиболее распространенных паразитарных болезней человека. В эпидемиологической классификации геогельминтозы выделены в отдельную группу заболеваний, для них характерно созревание яиц гельминтов до инвазионной стадии в почве. По оценкам ВОЗ, в мировом масштабе от геогельминтозов страдают примерно 2 млрд человек, в том числе 4 млн детей в Европейском регионе. Наиболее распространённым геогельминтозом в мире является аскаридоз.
Через почву люди могут заразиться трихоцефалёзом, токсокарозом, стронгилоидозом, анкилостомидозами и другими возбудителями паразитозов.
Методы лабораторного контроля за объектами окружающей среды предназначены для определения эффективности средств и методов дезинвазии, для осуществлением санитарно-паразитологического контроля органами и учреждениями Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека мероприятий по охране окружающей среды от загрязнения паразитарными агентами; а также проводятся организациями в целях производственного контроля (п.1 МУК 4.2.2661-10 «Методы санитарно-паразитологических исследований»).
Отбор проб почвы, песка проводят в соответствии с ГОСТ 17.4.4.02-2017 «Почвы. Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа»: «для гельминтологического анализа с каждой пробной площадки берут одну объединённую пробу массой 200г, составленную из десяти точечных проб массой 20г каждая, отобранных послойно с глубины 0-5 и 5-10см. При необходимости отбор проб проводят из глубоких слоёв почвы послойно или по горизонтам». В процессе транпортирования и хранения должны быть предприняты меры по предупреждению их вторичного загрязнения. Пробы для гельминтологического анализа доставляются в лабораторию сразу после отбора. При невозможности немедленного проведения анализа пробы хранят в холодильнике при температуре от 4 о С до 5 о С не более 7 суток.
В лабораторию доставляются пробы почв территорий для исследований на паразитологические показатели, установленные СанПиН 2.1.7.1287-03 «Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы»: яйца и личинки гельминтов (жизнеспособных), экз/кг; цисты патогенных кишечных простейших, экз/100 г.
По степени эпидемической опасности почвы разделены на категории загрязнения. Оценкой степени эпидемической опасности является количество яиц геогельминтов экз/кг: чистая (о); допустимая (до 10 экз/кг); умеренно опасная ( до 100 экз/кг) ; опасная (до 100экз/кг) и чрезвычайно опасная ( выше 100 экз/кг). При обнаружении возбудителей гельминтозов определяют род или вид возбудителя; жизнеспособность.
В соответствии с п.3.2. СанПиН 2.1.7.1287-03 «В почвах на территориях жилой застройки не допускается по санитарно-паразитологическим показателям наличие возбудителей кишечных паразитарных заболеваний (геогельминтозы, лямблиоз, амебиаз и др.); яиц геогельминтов, цист (ооцисты) кишечных патогенных простейших». Лабораториями ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Тульской области» в целях гигиенической оценки качества почв за 2017-2019г.г. на селитебных территориях Тульской области было отобрано 2362 пробы почвы (песка) из них 41 (1,7%) проба с паразитарным загрязнением. Доля проб почв в селитебной зоне, не соответствующих гигиеническим нормативам по паразитологическим показателям в Российской Федерации составляла -1,01% в 2017г.; 0,85% в 2018г.
Меры профилактики должны быть направлены на предотвращение загрязнения объектов окружающей среды экскрементами человека и животных и обеспечение дезинвазионных мероприятий, а также соблюдение мер личной гигиены.
Источник
Исследования проб почвы гельминтологические
Методы отбора и подготовки проб для химического, бактериологического, гельминтологического анализа
Nature protection. Soils. Methods for sampling and preparation of soil for chemical, bacteriological, helmintological analysis
Дата введения 1986-01-01
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 19 декабря 1984 г. N 4731 дата введения установлена 01.01.86
Ограничение срока действия снято по Приказу Минприроды России от 16.04.92 N 60
ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2008 г.
Настоящий стандарт устанавливает методы отбора и подготовки проб почвы естественного и нарушенного сложения для химического, бактериологического и гельминтологического анализа.
Стандарт предназначен для контроля общего и локального загрязнения почв в районах воздействия промышленных, сельскохозяйственных, хозяйственно-бытовых и транспортных источников загрязнения, при оценке качественного состояния почв, а также при контроле состояния плодородного слоя, предназначенного для землевания малопродуктивных угодий.
Стандарт не распространяется на контроль загрязнения, происшедшего в результате неорганизованных выбросов, прорыва очистных сооружений и в других аварийных ситуациях.
1. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ
Лопаты по ГОСТ 19596-87.
Ножи из полиэтилена или полистирола.
* Текст соответствует оригиналу. — Примечание изготовителя базы данных.
Холодильник, поддерживающий температуру от 4 до 6 °С.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-2001* с предельной нагрузкой 200 и 1000 г.
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. — Примечание изготовителя базы данных.
Сита почвенные с сеткой 0,25; 0,5; 1; 3 мм по ГОСТ 6613-86.
Спиртовки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82.
Ступки и пестики фарфоровые по ГОСТ 9147-80.
Ступки и пестики яшмовые, агатовые или из плавленного корунда.
Флаконы или банки стеклянные широкогорлые с притертыми пробками вместимостью 300, 500, 800, 1000 см .
Банки или коробки из пищевого полиэтилена или полистирола.
Шпатели металлические по ГОСТ 19126-2007.
Шпатели пластмассовые по ГОСТ 19126-2007.
Бумага оберточная по ГОСТ 8273-75.
Пакеты и пленка полиэтиленовые.
Тампоны ватно-марлевые стерильные.
Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, ч.д.а., раствор с массовой долей 3 и 10%.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77.
Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87.
Формалин технический по ГОСТ 1625-89, сорт высший, раствор с массовой долей 3%.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77, изотонический раствор с массовой долей 0,85%.
2. ПОДГОТОВКА К ОТБОРУ ПРОБ
2.1. Отбор проб проводят для контроля загрязнения почв и оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения. Показатели, подлежащие контролю, выбирают из указанных в ГОСТ 17.4.2.01-81 и ГОСТ 17.4.2.02-83.
Отбор проб для химического, бактериологического и гельминтологического анализов проводят не менее 1 раза в год. Для контроля загрязнения тяжелыми металлами отбор проб проводят не менее одного раза в три года.
Для контроля загрязнения почв детских садов, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха отбор проб проводят не менее двух раз в год — весной и осенью.
При изучении динамики самоочищения отбор проб проводят в течение первого месяца еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.
2.2. На территории, подлежащей контролю, проводят рекогносцировочные выезды. По данным рекогносцировочного выезда и на основании имеющейся документации заполняют паспорт обследуемого участка в соответствии с приложением 1 и делают описание почв в соответствии с приложением 4.
При контроле загрязнения почв предприятиями промышленности пробные площадки намечают вдоль векторов «розы ветров».
При неоднородном рельефе местности пробные площадки располагают по элементам рельефа.
На карты или планы наносят расположение источника загрязнения, пробных площадок и мест отбора точечных проб. Пробные площадки располагают в соответствии с ГОСТ 17.4.3.01-83.
2.3. Пробные площадки закладывают на участках с однородным почвенным и растительным покровом, а также с учетом хозяйственного использования основных почвенных разновидностей. Описание пробной площадки делают в соответствии с приложением 2.
2.3.1. Для контроля загрязнения почв сельскохозяйственных угодий в зависимости от характера источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности на каждые 0,5-20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером не менее 10х10 м.
2.3.2. Для контроля санитарного состояния почвы в зоне влияния промышленного источника загрязнения пробные площадки закладывают на площади, равной 3-кратной величине санитарно-защитной зоны.
2.3.3. Для контроля санитарного состояния почв на территории расположения детских садов, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5х5 м.
3. ОТБОР ПРОБ ПОЧВЫ
3.1. Точечные пробы отбирают на пробной площадке из одного или нескольких слоев или горизонтов методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа почвы. Количество точечных проб должно соответствовать ГОСТ 17.4.3.01-83.
Точечные пробы отбирают ножом или шпателем из прикопок или почвенным буром.
3.2. Объединенную пробу составляют путем смешивания точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.
3.3. Для химического анализа объединенную пробу составляют не менее чем из пяти точечных проб, взятых с одной пробной площадки. Масса объединенной пробы должна быть не менее 1 кг.
Для контроля загрязнения поверхностно распределяющимися веществами — нефть, нефтепродукты, тяжелые металлы и др. — точечные пробы отбирают послойно с глубины 0-5 и 5-20 см массой не более 200 г каждая.
Для контроля загрязнения легко мигрирующими веществами точечные пробы отбирают по генетическим горизонтам на всю глубину почвенного профиля.
3.3.1. При отборе точечных проб и составлении объединенной пробы должна быть исключена возможность их вторичного загрязнения.
Точечные пробы почвы, предназначенные для определения тяжелых металлов, отбирают инструментом, не содержащим металлов. Перед отбором точечных проб стенку прикопки или поверхность керна следует зачистить ножом из полиэтилена или полистирола, или пластмассовым шпателем.
Точечные пробы почвы, предназначенные для определения летучих химических веществ, следует сразу поместить во флаконы или стеклянные банки с притертыми пробками, заполнив их полностью до пробки.
Точечные пробы почвы, предназначенные для определения пестицидов, не следует отбирать в полиэтиленовую или пластмассовую тару.
3.4. Для бактериологического анализа с одной пробной площадки составляют 10 объединенных проб. Каждую объединенную пробу составляют из трех точечных проб массой от 200 до 250 г каждая, отобранных послойно с глубины 0-5 и 5-20 см.
3.4.1. Пробы почвы, предназначенные для бактериологического анализа, в целях предотвращения их вторичного загрязнения следует отбирать с соблюдением условий асептики: отбирать стерильным инструментом, перемешивать на стерильной поверхности, помещать в стерильную тару.
3.5. Для гельминтологического анализа с каждой пробной площадки берут одну объединенную пробу массой 200 г, составленную из десяти точечных проб массой 20 г каждая, отобранных послойно с глубины 0-5 и 5-10 см. При необходимости отбор проб проводят из глубоких слоев почвы послойно или по генетическим горизонтам.
3.6. Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале и пронумерованы. На каждую пробу должен быть заполнен сопроводительный талон в соответствии с приложением 3.
3.7. В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по предупреждению возможности их вторичного загрязнения.
3.8. Пробы почвы для химического анализа высушивают до воздушно-сухого состояния по ГОСТ 5180-84. Воздушно-сухие пробы хранят в матерчатых мешочках, в картонных коробках или в стеклянной таре.
Пробы почвы, предназначенные для определения летучих и химически нестойких веществ, доставляют в лабораторию и сразу анализируют.
3.9. Пробы почвы, предназначенные для бактериологического анализа, упаковывают в сумки-холодильники и сразу доставляют в лабораторию на анализ. При невозможности проведения анализа в течение одного дня пробы почвы хранят в холодильнике при температуре от 4 до 5 °С не более 24 ч.
При анализе на кишечные палочки и энтерококки пробы почвы хранят в холодильнике не более 3 сут.
3.10. Пробы почвы, предназначенные для гельминтологического анализа, доставляют в лабораторию на анализ сразу после отбора. При невозможности немедленного проведения анализа пробы хранят в холодильнике при температуре от 4 до 5 °C.
Для исследования на яйца биогельминтов почву без обработки хранят не более 7 сут, для исследования на яйца геогельминтов — не более 1 мес. При хранении проб для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 ч при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник.
При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают раствором формалина с массовой долей 3%, приготовленным на изотоническом растворе натрия хлористого с массовой долей 0,85% (жидкость Барбагалло), или раствором соляной кислоты с массовой долей 3%, а затем ставят в холодильник.
4. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
4.1. Для определения химических веществ пробу почвы в лаборатории рассыпают на бумаге или кальке и разминают пестиком крупные комки. Затем выбирают включения — корни растений, насекомых, камни, стекло, уголь, кости животных, а также новообразования — друзы гипса, известковые журавчики и др. Почву растирают в ступке пестиком и просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм. Отобранные новообразования анализируют отдельно, подготавливая их к анализу так же, как пробу почвы.
4.1.1. Для определения валового содержания минеральных компонентов из просеянной пробы отбирают представительную пробу массой не более 20 г и растирают ее в ступке из агата, яшмы или плавленого корунда до пудрообразного состояния.
Источник