Показатели санитарного состояния почвы
Критерии санитарного состояния почвы. Микрофлора почвы.
В почве обитает очень много микроорганизмов, т.к. в почве имеются благоприятные условия для их жизнедеятельности (питательные вещества, вода, защищённость от солнечных лучей).
В почве обитают бактерии, грибы, лишайники, простейшие, бактериофаги, водоросли, вирусы.
Почвенные бактерии:
а) аммонифицирующие бактерии, которые разлагают белки (p. Pseudomonas, p. Proteus, p. Bacillus);
б) азотфиксирующие бактерии (p. Azotobacter, Azomonas, Mycobacter);
в) нитрифицирующие (p. Thiobacillus); г) клубеньковые (p. Rhizobium);
д) серо- и железобактерии.
Состав микрофлоры почвы зависит от плодородия почвы, рН, температуры, освещения, количества влаги, способов обработки почвы, времени года и других факторов. Больше всего микроорганизмов находится в культурной почве, на юге, летом, на глубине 10-20 см.
Вместе с испражнениями, мочой, с отбросами и трупами животных и человека в почву попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных, патогенные и условно-патогенные микробы: кишечная палочка, Str. faecalis, возбудители брюшного тифа, сальмонеллёзов, дизентерии, возбудители холеры, клостридии газовой гангрены (C. Perfringens)..
В почве они через некоторое время погибают по различным причинам (недостаток питательных веществ, высыхания, действия света). Основная причина — антагонизм постоянных обитателей почвы (бактерий, актиномицетов, грибов).
Но некоторое время они сохраняются в почве. Сроки выживания – от нескольких дней до нескольких месяцев. Долго сохраняются в почве споры. Споры возбудителя сибирской язвы (Bac. anthracis), столбняка (Clostridium tetani), ботулизма (C. botulinum), газовой гангрены (C. perfringens и т.д.) сохраняются в почве в течение нескольких лет.
Таким образом, почва является фактором передачи инфекционных заболеваний. В связи с этим проводят санитарно-бактериологический контроль состояния почвы.
Оценка санитарного состояния почвы
Санитарно-показательными микроорганизмами почвы являются:
а) E. сoli (а также бактерии группы кишечной палочки (БГКП) — p. Citrobacter, p. Enterobacter, p. Klebsiella);
Эти бактерии имеют общий путь выведения с возбудителями кишечных инфекций (с фекалиями) и служат показателями фекальной загрязнённости почвы.
1. ОБЩЕЕ МИКРОБНОЕ ЧИСЛО (ОМЧ) ПОЧВЫ — общее количество микроорганизмов в 1 г почвы.
2. КОЛИ-ТИТР ПОЧВЫ, ПЕРФРИНГЕНС-ТИТР ПОЧВЫ и др. (оценивают количество санитарно-показательных микробов почвы).
КОЛИ-ТИТР ПОЧВЫ – наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка кишечной палочки – E.coli.
ПЕРФРИНГЕНС-ТИТР ПОЧВЫ — наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка возбудителя газовой гангрены — C. perfringens.
Методы определения.
1. Определение ОМЧ почвы:
а) посев 10-кратных разведений почвы (1:10, 1:100 и т.д.) в чашки Петри на МПА (для бактерий) и на сусло-агар или среду Сабуро (для грибов); посев можно делать в глубину (1 мл) или на поверхность (0,1 мл) среды;
б) инкубация посевов (48 час) при 24°С для грибов и при 37°С для бактерий;
в) подсчет числа колоний для каждого разведения;
в) расчет микробного числа почвы (с учетом навески почвы, разведения, объема посева), зная, что 1 колония – это 1 клетка.
2. Определение коли-титра почвы:
а) посев 10-кратных разведений почвы на жидкую среду Кесслера (содержит желчь, лактозу, пептон, генциановый фиолетовый, который подавляет рост многих микробов, кроме кишечной палочки);
б) инкубация при 37°С, 24 часа;
в) пересев положительных проб (образование газа и диффузное помутнение) на среду Эндо и инкубация при 37°С, 24 часа;
г) на среде Эндо E. coli образует тёмно-красные колонии с металлическим блеском; проводят микроскопическое подтверждение колоний E. coli (из подозрительной колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют; под микроскопом видны мелкие грам»-» палочки);
д) расчет коли-титра (с учетом разведения и навески почвы определяют количество почвы в граммах, в котором обнаружена клетка кишечной палочки).
3. Определение перфрингенс-титра почвы:
а) почвенную суспензию прогревают 10-15 мин при 80°С для того, чтобы неспоровые бактерии не росли на среде;
б ) посев 10-кратных разведений почвы на среду Вильсона-Блера и инкубация при 37 — 43° С, 3-18час или посев на среду Тукаева (молочная среда) и инкубация 3 – 4 часа;
в) на среде Вильсона-Блера C. perfringens образует чёрные колонии и газ разрывает среду, а на среде Тукаева наблюдается створаживание молока, а газ разрывает сгустки казеина и вытесняет в верхнюю часть пробирки; наличие C. perfringens подтверждается микроскопически (готовят мазок, окрашивают по Грамму и микроскопируют, под микроскопом видны крупные грам «+» палочки)
г) расчет перфрингенс-титра (с учетом разведения определяют количество почвы в граммах, в котором обнаружена клетка C. perfringens).Перфрингенс-титр определяется максимальным разведением почвенной суспензии, при посеве которого образуются на среде Вильсона-Блера характерные черные колонии.
Нормативы по коли-титру и перфрингенс-титру почвы.
| Оценка почвы | Коли-титр | Перфрингенс-титр |
| Незагрязнённая | 1 г и больше | 0,1 г и больше |
| Слабо загрязнённая | 0,1-0,01 | 0,01-0,001 |
| Умеренно загрязнённая | 0,01-0,001 | 0,001-0,0001 |
| Сильно загрязнённая | 0,001 и меньше | 0,0001 и меньше |
Вода – естественная среда обитания микроорганизмов. Состав микрофлоры воды зависят от химического состава воды, температуры, содержания CO2 и O2, рН, облучения солнечными лучами, содержания питательных веществ, флорой и фауной, глубиной водоёма, выпуском сточных и промышленных вод.
В пресных водоёмах (реки, озёра) нормальными обитателями являются Micrococcus roseus и др. микрококки, Pseudomonas fluorescens, извитые формы (Sp. rubrum). В воду поступают сапрофитные микробы почвы: p. Azotobacter, p. Nitrobacter, p. Proteus, p. Pseudomonas, p. Spirillum и др. Микробы воды участвуют в самоочищении водоемов. Они расщепляют органические вещества и делают их пригодными для усвоения другими организмами. Они являются также пищей для раков и моллюсков.
Больше всего микроорганизмов находится в придонных слоях, на дне, в прибрежной зоне (осенью и весной), т.к. на твердых частицах, в пористых материалах задерживаются питательные вещества. Чем больше органических веществ содержится в открытых водоёмах, тем у них более богатая микрофлора. В такой загрязненной органическими веществами воде можно обнаружить клостридии и другие анаэробы, увеличивается также количество аэробов (бактерий, вибрионов, спирохет). В водоёмах, богатых сероводородом, обитают фотосинтезирующие бактерии.
Таким образом, микрофлора рек и озёр определяется, в основном, степенью их биологического загрязнения, которое происходит при поступлении в водоемы сточных и промышленных вод. В большой степени она отражает микрофлору почвы около водоёма, т.к. микроорганизмы попадают в воду с частичками пыли, ливневыми, сточными, талыми водами. Микроорганизмы также попадают в водоёмы из организма рыб, гниющих растений, с отбросами и выделениями человека, животных, а также из воздуха.
В морях и океанах обитает меньшее количество микробов, чем в пресных водоемах. Это, в основном, солелюбивые (галофильные) и светящиеся микроорганизмы.
В воду могут попадать патогенные и условно-патогенные микробы из почвы, вместе со сточными и промышленными водами из населённых пунктов и плавающих судов, при стирке белья, купании лошадей, при попадании в воду трупов грызунов и других животных, погибших от инфекций.
Эти бактерии не приспособлены к существованию в воде и через некоторое время погибают. Но определенное время они сохраняются в воде: сальмонеллы – от 2 дней до 3 месяцев, шигеллы 5-9 дней, лептоспиры 7-150 дней, холерный вибрион до нескольких месяцев и даже может размножаться.
Таким образом, вода может быть фактором передачи инфекционных заболеваний (брюшного тифа и паратифа, дизентерии, сальмонеллёза, холеры, лептоспироза, полиомиелита, гепатита, туляремии). В связи с этим необходимо проводить санитарно-эпидемиологический контроль состояния воды.
Источник
Санитарно-показательные микроорганизмы почвы.
К санитарно-показательным микроорганизмам, которые определяют в почве, относятся БГКП, Clostridium perfringens, термофильные и нитрифицирующие бактерии (табл. 8).
По количеству БГКП судят о фекальном загрязнении почвы и о наличии прочих энтеробактерий. Важным критерием санитарного состояния почвы и ее способности к самоочищению является содержание Clostridium perfringens. Эти микроорганизмы свидетельствуют о фекальном загрязнении, при этом эшерихии исчезают уже через 4—5 мес, а клостридий обнаруживают в титре 0,01 г. Определение термофильных бактерий помогает оценить загрязнение почвы навозом, компостом или сточными водами и стадию разложения их органического субстрата. Появление нитрифицирующих бактерий указывает на развитие процесса самоочищения. Для более полной оценки процесса самоочищения определяют также группы микроорганизмов, быстро разрушающих органический субстрат: бациллы, актиномицеты, грибы.
Таблица 8. Требования к микробиологической чистоте почв
| Категория почвы | Титр БГКП | Титр нитрифици-рующих бактерий | Титр клостридий | Индекс термофильных микроорганизмов |
| Чистая Загрязненная Сильно загрязненная | >1,0 0,9-0,01 0,1 0,09-0,001 0,001 0,009-0,0001 ОЧС, а в чистых ОМЧ = ОЧС или ОМЧ Сочетание ОМЧ и нитрификаторов используют для распознавания и отличия чистых почв от почв, бывших загрязненными, но находящихся на стадии минерализации. Для них характерно низкое ОМЧ, но высокое число нитрификаторов. То же самое можно сказать и при сопоставлении общего числа сапрофитов и процентов споровых аэробов. Если процент споровых форм к ОЧС высок (40—60%), то это характерно для чистых почв, если же низок (25%), то почва загрязнена. Отбор и подготовка проб. Перед отбором пробы заполняют сопроводительные документы с описанием местности (характер рельефа, растительности и т.д.), предполагаемых источников загрязнения. Пробы отбирают с прямоугольного участка размером не менее чем 5 х 5 м из 5 точек («метод конверта»). При этом в условиях асептики берут с глубины 20—25 см образцы для приготовления смешанной пробы весом 1 кг. Пробу помещают в стерильную посуду, маркируют. Исследование пробы желательно проводить в тот же день, допускается хранение материала в течение 24 часов при температуре 4-5ºС. Перед исследованием образцы почвы освобождают от крупных включений, растирают в ступке и просеивают через стерильное сито с диаметром пор 3 мм. Масса навесок для исследования зависит от цели исследования. Навеску почвы помещают в стерильную колбу и заливают стерильной водопроводной водой в соотношении 1:10. Полученную смесь встряхивают 10-15 мин, затем 2-3 мин. отстаивают. Полученную суспензию используют для приготовления последующих разведений. Определение ОМЧ. ОМЧ почвы определяют глубинным посевом (на плотной среде) из 10-кратных разведений или методом прямой микроскопии (по Перфильеву). Для глубинного посева готовят несколько разведений почвенной суспензии (10 -2 , 10 -3 , 10 -4 и т.д.) Для посева выбирают разведения исходя из загрязненности почвы. По 0,1 мл выбранных разведений смешивают с 40 мл расплавленного и остуженного до 45ºС питательного агара, после чего выливают вторым слоем в чашки Петри с питательным агаром. Посевы инкубируют при 28-30ºС в течение 72 часов и подсчитывают количество выросших колоний. Для подсчета колоний выбирают такие разведения почвенной суспензии, при которых на чашках вырастает от 50 до 150 колоний. Затем делают пересчет на 1 г почвы с учетом разведений. При использовании прямого метода по Б.В. Перьфильеву к 1 мл почвенной суспензии в разведении 1:10 добавляют 1-2 капли раствора акридинового оранжевого. Затем каплю суспензии помещают в капиллярную камеру. Капилляр помещают на предметное стекло, фиксируют парафином и исследуют при помощи люминесцентной микроскопии. Затем делают пересчет на 1 г почвы. Источник 129. Санитарно-показательные микробы почвы и их определениеОсновные характеристики санитарно-показательных микроорганизмов. СПМ должен постоянно обитать в организме чселовека или животных и постоянно выделяться во внешнюю среду. СПМ не должен размножаться на объектах окружающей среды. Длительность выживания СПМ во внешней среде должна соответствовать длительности выживания патогенных микроорганизмов. Методы идентификации и дифференциации СПМ должны быть просты и удобны. Для выявления общей микробной обсемененности определяют общее микробное число (ОМЧ) путем подсчета всех микроорганизмов (растущих на питательных средах) в 1г или 1мл субстрата. Количество СПМ выражают в титрах и индексах. Санитарная оценка почвы по микробиологическим показателям. При санитарной оценке почвы учитывают результаты химического, микркобиологического и гельминтологического исследований. -Микробиологическое исследование проводят для санитарной оценки почвы,. Характеристики процессов самоочищения, оценки методов обезвреживания отбросов, при определении пригодности участков для строительства, а также при эпидемиологических и эпизоотологических обследованиях с целью выяснения путей заражения почвы, продолжительности выживания в ней патогенных микробов и т.д. В зависимости от поставленной задачи применяют краткий или полный санитарно-бактериологический анализ почвы. -Краткий санитарно-микробиологический анализ предусматривает определение общего микробного числа(ОМЧ), титров бактерий группы кишечной палочки (БГКП), энтерококков, перфингенс-титра(наименьшее количество почвы, в котором обнаруживается Clostridium perfringens), термофильных , бактерий, нитрифицирующих бактерий. Полученные результаты указывают на наличие и степень фекального загрязнения. Краткий анализ почвы осуществляется при проведении текущего санитарного надзора за состоянием почвы. Полный санитарно-микробиологический анализ включает определение всех показателей краткого анализа, а также общей численности сапрофитов. ОМЧ и процентного содержания споровых микроорганизмов, аэробных бактерий, разрушающей клетчатку, бактерий-аммонификаторов. Исследуют токсичность почв для микроорганизмов. Полный анализ проводят при осуществлении предупредительного санитарного надзора, первичном обследовании при выборе территории для размещении отдельных объектов. Прямое обнаружение патогенных микробов в почве проводят только при расследовании вспышек инфекционных заболеваний. В качестве косвенных показателей возможного загрязнения почвы патогенными бактериями используют санитарно-показательные микроорганизмы: бактерии группы кишечной палочки, Cl. Perfingens, бактерии рода Proteus, термофильные бактерии. Наличие в почве бактерий группы кишечной палочки свидетельствует о ее фекальном загрязнении. В загрязненных участках почвы коли-титр составляет 1*10^4, тогда как в чистых почвах коли-титр может быть равен 1 и выше. Обнаружение Cl. Perfingens в почве также указывает на ее фекальное загрязнение. Методы опредения состава и активности микроорганизмов почвы. Почвенная биота – это совокупность живых организмов, населяющих почву. В их число входят: бактерии, грибы, актиномицеты, водоросли, микроскопические животные, а так же лишайники и зеленая растительность, имеющая в почвах свою корневую зону. Обычно, чем плодороднее почва, тем больше в ней содержится живых организмов, и тем разнообразнее они по видовому составу. Биологическую активность почвы определяют следующими способами: — подсчетом общего количества почвенных микроорганизмов — определением количества отдельных физиологических групп , например микроорганизмов нитрифицирующих и целлюзоразлагающих бактерий. Появление нитрифицирующих бактерий указывает на развитие процесса самоочищения, так как они завершают цикл разложения азотосодержащих соединений, превращая аммиак в азот. При свежем фекальном загрязнении нитрификаторов не будет, поскольку субстрат для их развития отсутствует. В ходе жизнедеятельности микроорганизмов, разлагающих орг.вещества, образуется аммиак, что приводит к развитию нитрификаторов. — определение выделения из почвы диоксида углерода – биохимический способ определения биологической активности почвы. Чем интенсивнее выделение углекислого газа из почвы, тем активнее происходит в ней биологические процессы, тем лучше условия для возделывания сельскохозяйственных культур и выше их потенциальная урожайность. Отбор проб производят с квадратного участка(не менее 5*5) из 5 точек – из каждого угла и центра квадрата («метод конверта»). Образцы забирают в условиях асептики с глубины 20-30 см. объем образцов 1 кг. Периодичность контроля: не реже 1 раза в год. Источник ➤ Adblockdetector |