Питательная среда для выращивания плесени

Учебно-исследовательская работа «Развитие плесени в различных средах и при разных условиях»

В данной работе выясняется влияние разных питательных сред на развитие белой и сизой плесени. Для этого выращиваются оба вида плесени и помещаются в разные среды.

Скачать:

Предварительный просмотр:

МОУ «Средняя общеобразовательная школа № 27»

в различных средах и при разных условиях

Автор работы: Любимова Екатерина,

ученица 3 А класса

МОУ «Средняя школа №27»

Руководитель: Терлецкая Н.В.

городской округ Саранск

Выяснить приспособленность к различным условиям разных видов плесени.

1. Вырастить плесень.

2. Выявить влияние разных питательных сред на развитие белой и сизой плесени.

1. Белая плесень развивается быстрее, чем сизая.

2. Две плесени не смогут выжить, развиваясь вместе.

Плесени – это налёты на продуктах питания, растительных остатках и других органических средах, образованные так называемыми плесневыми грибами.

Споры плесени присутствуют в воздухе практически повсюду. Если им удаётся попасть в благоприятные условия и получить доступ к питательным веществам, то они начинают размножаться быстрыми темпами.

Плесень состоит из множества длинных, бесцветных нитей, на которых имеются ответвления двух видов. Длинные ответвления имеют на конце маленькие чёрные шарики, содержащие споры. Другие, более короткие, проникают вглубь поверхности, на которой находится плесень, и являются своего рода корнями, извлекая питательные вещества.

Плесень не способна производить пищу для себя самостоятельно – так, как это делают зелёные растения, а потому учёные относят её к простейшим грибковым паразитическим растениям.

В данной работе будут исследоваться только два вида плесени – белая (головчатая) и сизая (кистевик).

Грибница у белой плесени разветвляется со столбиками, имеющими на верху круглую головку, в которой свыше 10 тысяч спор. Все части головчатой плесени не имеют перегородок, и вся плесень является одной разветвленной клеткой.

Сизая плесень имеет грибницу с перегородками. Концы нитей грибницы образуют веточки в виде кисточек, состоящих из круглых клеточек – спор.

На рисунках изображены представители этих двух видов: белой плесени – мукор, и сизой – пеницилл.

Выращивание белой и сизой плесени

Для опытов мне понадобилось несколько стеклянных банок. Все они были предварительно простерилизованы. Я заложила в одну банку немного варенья, а во вторую – кусочек влажного хлеба. Обе банки я закрыла плотными крышками и поставила их в тёмное место.

Уже через три дня в банке с хлебом показались волокна белой плесени. Они стали быстро расти, а через неделю плесень осела. Её волокна стали уплотняться и приобретать тёмный цвет.

Она развивалась очень медленно, только через 6 дней в банке с вареньем у неё появились почти невидимые волокна. За две недели она почти не изменилась.

Я решила споры плесени поместить в разные среды. Я взяла 9 банок и разделила их на три группы по три банки в каждой. В банки первой группы я положила по кусочку хлеба, в банки второй группы — по кусочку финика, а в банки третьей — варёную гречневую крупу.

В каждой группе банки я пронумеровала. Так, банки с №1 я заразила белой плесенью, с №2 – сизой плесенью, а с №3 – обоими видами плесени.

По моему предположению, я ожидала быстрого развития белой плесени во всех случаях, а в банках с №3 гибель обоих видов плесени, возможно, из-за конкуренции между собой.

Вот как выглядит плесень на кусочке хлеба. Как видно, плесень развивается колониями, их на хлебе я насчитала около десяти.

Мои наблюдения за развитием плесени отражены в таблице.

Плесень развивалась быстро

Плесень развивалась медленнее, чем в №1 и №3

Плесень развивалась быстро

Плесень развивалась медленней всех и волокон почти не видно

Начала развиваться только на 5 — 6 день

Начала развиваться только на 5 — 6 день

Быстрое развитие белой плесени

Плесень стала развиваться позднее, чем в банках 1 и 3, но через короткий промежуток времени плесень в банке 2 достигла уровня развития белой плесени в банках 1 и 3

Быстрое развитие получила белая плесень

Для проведения опыта я взяла 3 вида питательных сред, и оказалось, что наиболее благоприятными для развития разных видов плесени являются разные среды.

Две банки для каждой среды являются контрольными, так как они заражаются одним видом плесени, а третья банка – опытная, в ней одновременно присутствуют оба вида плесени. Плесень развивается быстрее и гуще в той среде, в которой лучше среда существования. В каждой серии из 3 банок с одинаковой питательной средой раньше появляется тот вид плесени, для которого данная среда является более благоприятной. Так, белая плесень появляется раньше в серии из трёх банок, содержащих в качестве питательной среды кусочки хлеба.

Таким образом, моя первая гипотеза оправдалась частично. Действительно, белая плесень в некоторых случаях развивается быстрее и интенсивнее, чем сизая. Но зависит это от питательных сред, которые способствуют быстрому (или медленному) произрастанию плесени.

При нахождении в пробирках обоих видов плесени вместе преобладает развитие того вида, для которого данная питательная среда является наиболее благоприятной, а развитие другого вида плесени угнетается.

Плесень обоих видов не погибает, оказавшись вместе. Моя вторая гипотеза оказалось в корне неверной.

В результате проделанной работы я пришла к выводу, что при изменяющихся условиях среды обитания различные виды плесени конкурируют друг с другом, приспосабливаясь тем самым к обитанию в новой для них среде и к совместному обитанию, вытесняя конкурента или останавливая свое развитие.

Источник

Творческие проекты и работы учащихся

Выращивание белой и сизой плесени

Цель: рассмотреть конкурентный тип отношений двух видов плесени.

Объект исследования – плесневые грибы: пеницилл и мукор (белая и сизая плесень соответственно)

Оборудование и материалы – кусочки хлеба и фруктов, чашки Петри, вода.

Для выращивания плесени я взяла две чашки Петри.

Для получения сизой плесени на дно чашки поместила увлажненный кусочек хлеба. Для получения белой плесени в другую чашку поместила разрезанный мандарин. Чашки поставила в теплое место при температуре выше 20 градусов. Плесени образуются примерно через неделю.

Каждый день открывала банки и следила, чтобы продукты (питательные среды) были влажными.

В одной пробирке, где был хлеб, плесень (мукор) появилась уже на 3 день (рис. 4), а в другой (с мандарином — пеницилл) только на 5 день (рис. 5). Опыт проводился в одинаковых температурных условиях.

Затем взяла чистые чашки Петри в одну положила хлеб, в другую сыр, а в третью – мандарин. Чашки подержала 30 мин над кипящей кастрюлей и закрыла. Это сделала для того, чтобы устранить посторонние микроорганизмы. В каждую чашку поместила два вида плесени: одной ватной палочкой дотронулась до белой плесени, а другой – до сизой. Затем каждой палочкой дотронулась до хлеба, сыра и мандарина.

Через 2 дня я заметила, что в пробирке с хлебом (рис. 6) и сыром (рис. 7) хорошо растет мукор, пеницилла мало. И, наоборот, в пробе с мандарином (рис. 8) пеницилл развивался лучше, чем другой вид плесени.

Результаты работы по выращиванию плесени

Опыты были поставлены с 17 декабря по 30 декабря 2016 года. Наблюдения проводились ежедневно. Наблюдая за развитием плесени в чашках Петри, отмечали, какая плесень, и на какой среде появилась раньше.

Результаты наблюдений:

• 20 декабря — появилась сизая плесень в чашки Петри, в которой содержались в качестве питательной среды кусочки белого хлеба.
• 22 декабря — появилась белая плесень в чашки Петри, в которой содержалось в качестве питательной среды мандарин.
• 24 декабря — в чашках с хлебом и сыром обильно развивается мукор и малое количество плесени пеницилла соответственно.
• 27 декабря — мукор угнетается в чашке с мандарином.
• 30 декабря – белая плесень в чашке с хлебом и сыром угнетена. В чашке для выращивания мукора и пеницилла (питательная среда — белый хлеб и сыр) обильно развивается мукор.
• 30 декабря – сизая плесень в чашке с мандарином угнетена. В чашке для выращивания мукора и пеницилла (питательная среда-мандарин) преобладает развитие белой плесени.

Заключение

В ходе проделанной работы я изучила дополнительную литературу о строении мукора и пеницилла, познакомилась с понятиями «борьба за существование», выявила влияние разных сред на жизнеспособность мукора и пеницилла.

По результатам работы можно сделать следующие выводы:

1. В природе существует межвидовая борьба за существование между грибами мукор и пеницилл.
2. В борьбе за пищевые ресурсы между представителями разных видов плесени идет конкуренция, которая может привести к процветанию и высокой плодовитости одного вида и понижению плодовитости и гибели части особей другого вида.
3. По принципу конкурентного исключения, лучше будет чувствовать себя тот вид плесневого гриба, для которого пищевая среда благоприятна. Развитие другого вида будет угнетено.
4. Условия существования для пеницилла отличаются от таковых у мукора и по питательной среде и по температурному режиму и по показателю влажности. Так у нас пеницилл развивался дольше, так как для него оптимальная температура должна быть немного ниже, а влажность воздуха выше.
5. Наша гипотеза подтвердилась: в борьбе за пищевые ресурсы успешно будет расти плесень, для которой пищевая среда и влажность благоприятные.

Также я узнала, что:

• Сизую плесень чаще всего можно встретить на сыре и хлебе. Многие штаммы этого паразита опасны для людей.
• Белая плесень – одна из самых опасных. Поражает всё! Проникает глубоко в продукты и неприхотлива в распространении.

Проделанная исследовательская работа позволяет мне дать советы о том, как предотвратить появление плесени на продуктах питания:

1. Использовать остатки продуктов в течение 3-4 дней.
2. Очищать холодильник 1 раз в месяц с помощью пищевой соды. Для получения раствора 1 ст. ложку соды растворяют в литре теплой воды.
3. Регулярно очищать видимые поверхности губкой, смоченной в воде с дезинфицирующим средством. Можно размешать 3 ч. ложки хлорки в литре воды.

Отзывы об исследовательской работе

В ходе данной работы я узнала много нового и интересного из жизни одноклеточных грибов. Научилась проводить наблюдения за живыми объектами, сравнивать и анализировать полученные данные. Проведеннаямною работа была интересна и познавательна.

Источник

Питательная среда для выращивания плесени

Основы работы с агаром

Агар (устаревшее название агар-агар) – продукт, получаемый из красных и бурых водорослей (таких как Eucheuma spinosum Ag., E. gelatinae Ag., Gelidium cartilagineum (Grev. и др.) и образующий в водных растворах плотный студень. Представляет собой белый, похожий на муку порошок.

Состоит в основном из полисахаридов. Применяется в составе питательных сред для культивирования бактерий, грибов, водорослей, а также в кондитерской промышленности, при производстве желейного мармелада, желе, пудингов, мясных и рыбных студней, и т.д.

Биологический (лабораторный) агар отличается от пищевого более высоким качеством, стоимость пищевого агара при этом намного ниже. При использовании в домашних условиях, качество агара является не столь значимым, поэтому есть смысл, брать именно агар используемый в кондитерской промышленности.

Пищевой агар разделяется по плотности, например: Агар М 500, Агар G 700, Агар –900, и т.д. Чем больше число в названии, тем большей вязкостью / плотностью будет обладать полученный гель / студень. Пропорционально увеличению плотности, уменьшается расход агара, но при этом увеличивается его цена.

Если плотность агара неизвестна, его расход можно подобрать экспериментальным путем, получив среду напоминающую по консистенции мармелад. Если среда будет слишком мягкая, Вам будет неудобно переносить отрезанные кусочки.

Найти где продается агар, можно на сайте журнала товары и цены, набрав слово «агар» в строке поиска.

Для выращивания мицелия высших базидиомицетов используются различные питательные среды на агаровой основе. В зависимости от выращиваемого вида, а так же от поставленных целей, питательные среды могут различаться по составу, уровню Ph, вязкости и т.д.

Не будем подробно останавливаться на приготовлении сложных агаровых сред, кому интересен этот вопрос, без труда сможет отыскать необходимую информацию в соответствующей литературе. Рассмотрим приготовление двух самых простых, и в тоже время, подходящих для выращивания огромного количества видов грибов, питательных средах — среды на зерновом, и среды на картофельном отваре.

Питательная среда из зернового отвара

Состав: Зерновой отвар* -100 мл**; агар — 1,5 г.***

* Можно использовать отвар, который остается у Вас после приготовления зерна (если Вы используете зерно в качестве субстрата), но только если зерно варилось без добавления Н2О2. В противном случае, агар попросту не застынет.

**Расход среды на одну 100 мм чашку Петри

*** При использовании девятисотого агара.

Берем около 100 мл зерна (пшеница, рожь, ячмень, овес и т.д.),

высыпаем в емкость,

заливаем 500 мл воды (используется обычная вода из-под крана),

доводим до кипения,

делаем маленький огонек, и варим в течение 30 минут.

За это время часть воды выкипит, а оставшаяся часть окрасится в приятный, темно-коричневый цвет.

Получившийся отвар необходимо профильтровать. В качестве фильтра можно использовать сложенную в несколько слоев марлю, или хлопчатобумажную ткань. Их укладывают в сито или воронку и аккуратно выливают отвар.

Зерно и мелкие частицы, оставшиеся на фильтре выбрасывают.

Если количество отвара получилось меньше, чем Вы рассчитывали, доведите его до нужного объема долив необходимое количество воды (используется обычная вода из-под крана).

Получившийся отвар переливаем в небольшую емкость,

ставим на газ, доводим до кипения и уменьшаем огонь.

Добавляем необходимое количество агара, постепенно* высыпая его в кипящий отвар. *(Если агар высыпать сразу, он слипнется в комок, который будет потом очень нелегко растворить в жидкости).

Размешивая, снова доводим отвар до кипения.

Продолжая постоянно помешивать, добиваемся ПОЛНОГО растворения агара. Как только это произойдет — среда готова.

После приготовления, тут же разливаем готовую среду по чашкам Петри. (Чашки Петри сделаны из закаленного стекла, поэтому они не лопнут.)

Наливать среду, следует слоем 3-5 мм.

После этого накрываем чашки Петри,

и установив их одна на другую в какую-нибудь тарелку или блюдце, (так будет удобнее переносить их с места на место),

ставим в скороварку (или кастрюлю),

и стерилизуем в течение 1 часа.

Питательная среда из картофельного отвара

Состав: Картофельный отвар -100 мл; агар — 1,5 г.

Берем 150 г картофеля,

тщательно отмываем его от земли,

не очищая, нарезаем кубиками

высыпаем в емкость,

заливаем 500 мл воды (используется обычная вода из-под крана),

доводим до кипения,

делаем маленький огонек, и варим в течение 30 минут.

За это время часть воды выкипит, а оставшаяся часть окрасится в светло-желтый цвет.

Полученный отвар, так же необходимо профильтровать.

С готовым отваром, поступаем точно так же, как и в предыдущем случае.

Изготовление инокуляционной петли

Берем самую длинную, какую сможем найти иглу (замечательно подходит «набор игл для шитья кукол»),

и не очень сильно, расплющиваем молотком 1-2 см ее острия.

Должно получиться что-то подобное.

Зажав самый кончик иглы (5-7 мм) в тисках, загибаем его под прямым углом (буквой «Г»),

и слегка приплющиваем по бокам.*

*Это делается это для того, чтобы обеспечить лучший контакт инокуляционной петли при соприкосновении с поверхностью.

Теперь делаем ручку — оборачиваем противоположенный конец иглы изолентой.

В результате получается вот такая, (очень удобная для работы со спорами) инокуляционная петля.

Аккуратно, стараясь не сдвигать крышки, вынимаем чашки Петри из остывшей скороварки, и откачиваем шприцем воду скопившеюся в блюдце.

Конденсат образовавшийся внутри, на крышках чашек Петри, опасности не представляет.

Работы по проведению инокуляции, должны проводиться в стерильных условиях! Для этого, все необходимые инструменты (инокуляционную петлю, скальпель, вату, спирт, горелку и т.д.), а так же приготовленные чашки Петри, переносят в помещение, которое затем, в течение некоторого времени* обрабатывают бактерицидной лампой.

*(30-60 мин., зависит от площади помещения и мощности лампы.)

Зайдя в помещение, расставляем инструменты так, чтобы нам было удобно работать. Протираем спиртом все поверхности.

Инокуляционную петлю погружаем в спирт,

и прокаливаем ее докрасна над пламенем горелки.

Затем снова погружаем в спирт,

подносим к горелке, и тут же (пока горит спирт) несем петлю к чашке Петри.

Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), погружаем инокуляционную петлю в агар*.

*Это делается для того, чтобы инокуляционная петля стала липкой от оставшегося на ней расплавленного агара. (Так же, при этом происходит охлаждение инокуляционной петли до безопасной для спор температуры.)

Сразу же после этого, слегка приоткрыв пакетик с отпечатком, не касаясь его краев, соскребаем инокуляционной петлей часть спор*.

*Если отпечаток хорошего качества, достаточно едва коснуться петлей, чтобы к ней прилипли тысячи спор. Если отпечаток совсем бледный, можно основательно поскрести острым концом инокуляционной петли по бумаге, чтобы вместе с частичками бумаги наверняка захватить часть спор.

После этого, сразу же переносим инокуляционную петлю обратно к чашке Петри, и так же, слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), касаемся поверхности агара в нескольких местах.

Если спор было достаточно много, они будут заметны на поверхности агара. Если спор было мало, на агаре останутся только следы от контакта с инокуляционной петлей. В любом случае, споры попали на питательную среду, в благоприятные условия, и через несколько дней должны прорасти.

Обязательно подписывайте свои чашки Петри (название вида, дату инокуляции и т.д., все, что считаете нужным), иначе потом Вы запутаетесь, что, где растет.

Теперь, чашки Петри необходимо обернуть пищевой пленкой. Это делается для того, чтобы предотвратить проникновение в них посторонних микроорганизмов.

Накладываем пленку поверх чашки Петри,

поднимаем чашку Петри, опуская при этом пленку

и обрезаем ее с небольшим запасом.

Теперь стягиваем края пленки вниз по всему периметру чашки Петри,

и закручиваем их (как фантик).

Закрученные края плотно прижимаем рукой

и в таком виде, убираем чашки Петри в темное, теплое (23-27С) место, на весь период инкубации.

Через 3-10 дней (в зависимости от количества и качества спор) споры прорастают — в местах инокуляции появляется белый пух мицелия.*

* Мицелий любого другого цвета, или консистенции, (например пленка, или слизь) является явным признаком заражения и должен быть немедленно удален.

Через несколько дней, очагов мицелия становится больше, и он продолжает разрастаться.

Очаги мицелия могут появляться не только в местах, контакта с инокуляционной петлей, но и по всей поверхности агара. Это происходит потому, что пока Вы совершали манипуляции внутри чашки Петри, некоторые споры упали с инокуляционной петли сами по себе, и теперь они проросли. Так же, споры могли переместиться в результате движения жидкости (упавшие капли конденсата).

Если во время инкубационного периода, заражения среды посторонними микроорганизмами не происходит, через 3-4 недели, мицелий полностью осваивает поверхность агара.

После того, как мицелий полностью освоит поверхность агара, чашки Петри убирают на хранение в холодильник. При температуре +3-5С процессы жизнедеятельности мицелия замедляются, и он может сохраняться в таких условиях несколько лет. В течение этого времени мицелий постепенно поедает питательную среду, поэтому, чем толще был ее слой, тем дольше мицелий сможет питаться.

По мере надобности, чашки Петри с мицелием достают из холодильника и отрезают кусочки агара для проведения инокуляции*, или для пересадки культуры на свежую питательную среду.**

*Для проведения инокуляции отрезают небольшой (

1х1 см) кусочек агара с мицелием и помещают его в емкость с субстратом. Через несколько дней мицелий перебирается на субстрат и постепенно осваивает его целиком. Фото работ по проведению инокуляции кусочками агара, можно посмотреть в иллюстрированном руководстве по выращиванию грибов.

Поскольку для проведения одной инокуляции, достаточно малюсенького кусочка агара, одной 100 мм чашки Петри, хватает на проведение 20-30 инокуляций.

**Такой метод хранения, называется «метод вегетативных пассажей», он позволяет сохранять полученную культуру практически в неизмененном виде. Чем реже происходит пересев, тем меньше клеточных делений претерпевает культура и тем ближе она по своим свойствам к исходному изолянту. Пересадку мицелия на новую среду, в этом случае, рекомендуется проводить не чаще одного раза в год.

Для длительного хранения культур, удобно использовать пробирки со скошенным агаром. Готовую среду разливают по пробиркам, закрывают их ватно-марлевой пробкой, и после стерилизации, пока агар не застыл, устанавливают в наклонном положении — скашивают агар. После того как агар застынет, пробирки инокулируют мицелием, дожидаются полного обрастания поверхности агара, и убирают на хранение в холодильник.

Длительность хранения при этом, достигается за счет уменьшении площади роста мицелия и увеличении толщины питательного слоя (по сравнению с чашкой Петри).

Более подробную информацию о методе хранения культур в пробирках на скошенном агаре, а так же о выделении чистой культуры из плодового тела гриба, Вы сможете найти в тексте «Отечественные техники выращивания грибов в домашних условиях».

Выделение чистой культуры*

* Чистая культура — это клетки микроорганизмов одного вида. (В нашем случае, это мицелий культивируемого гриба).

Если во время роста мицелия, произошло заражение среды посторонними микроорганизмами, необходимо как можно быстрее отделить чистый мицелий, от конкурирующей микрофлоры. Это можно сделать двумя способами.

1. Удаление очага заражения

В случае «точечного заражения», (когда очаг заражения небольшой и локализован в одном месте), его проще вырезать и выбросить, оставив не тронутой основную часть мицелия.

Работы по выделению чистой культуры, должны проводиться в стерильных условиях!

Берем чашку Петри, в которой произошло заражение,

входим с ней в стерильное помещение, протираем все поверхности спиртом, погружаем скальпель в спирт, прокаливаем его над пламенем горелки, снова погружаем в спирт, подносим к горелке, и тут же (пока горит спирт), несем его к чашке Петри.*

*Смотри фото аналогичных действий при работе с инокуляционной петлей.

Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), вырезаем скальпелем кусок агара, с растущей на нем плесенью,

подцепляем его кончиком скальпеля и удаляем.

Чашку Петри с удаленным очагом заражения оборачиваем пищевой пленкой и убираем в темное, теплое место, на весь период инкубации.*

*Смотри фото аналогичных действий при проведении инокуляции.

Если заражения посторонними микроорганизмами не произойдет, через некоторое время (зависит от того, на какой стадии роста мицелия произошло удаление очага заражения), мицелий полностью освоит поверхность агара.

2. Пересадка мицелия

В случае, когда посторонняя микрофлора занимает значительную часть, и вырезать ее не представляется возможным, из зараженной чашки Петри извлекают кусочек агара с чистым мицелием, и пересаживают его на новую среду в другую чашку Петри.

Берем чашку Петри, в которой произошло заражение, входим с ней в стерильное помещение, протираем все поверхности спиртом, погружаем скальпель в спирт, прокаливаем его над пламенем горелки, снова погружаем в спирт, подносим к горелке и тут же (пока горит спирт) несем его к чашке Петри.*

*Смотри фото аналогичных действий при работе с инокуляционной петлей.

Слегка приоткрыв крышку (не смещая ее в сторону), вырезаем скальпелем кусочек агара с чистым мицелием,

подцепляем его кончиком скальпеля

и переносим на новую среду, в другую чашку Петри.

Чашку Петри накрываем, подписываем, оборачиваем пищевой пленкой и убираем в темное, теплое место на весь период инкубации.*

*Смотри фото аналогичных действий при проведения инокуляции.

Через несколько дней, пересаженный кусочек опушится мицелием, а еще через несколько дней мицелий переберется на новую среду. Если заражения посторонними микроорганизмами не произойдет, через 3-4 недели, мицелий полностью освоит поверхность агара.

Поплавки из ПВХ Серия-L, L-160, 166*46*9 мм, 160 г (упак. 250 шт.)

Удилище Stinger Blaxter Feeder, 60-120 г, 3,60 м

Зимняя леска Hi-Max 30 м, 0,22 мм/5,0 кг, Флуоресцентный

Дели капроновые узловые в большой упаковке Астраханская сетевязальная фабрика (15-19 кг), 10 мм, Дель узловая, 210den/12, высота 250 ячей, (уп. 18-19 кг), зеленая

Источник