Сравнительный анализ качества питательных сред различных производителей для выделения энтеробактерий
Для выделения патогенных энтеробактерий используется большой арсенал селективных дифференциально-диагностических питательных сред отечественного производства и их импортные аналоги.
Цель исследования – сравнительные испытания питательных сред отечественного и импортного производства.
В испытаниях использовались агар Эндо и SS-агар производства ФГУН ГНЦ ПМБ, «Merck» (Германия), «HiMedia» (Индия) и «Pronadisa» (Испания), приготовленные в соответствии с требованиями производителей.
Результаты исследований показали, что рН, аминный азот и содержание хлоридов питательных сред всех производителей находятся в одном диапазоне. Основное отличие наблюдается в прочности агарового студня по Валенту: для импортных сред – 600-800 г, для сред производства ГНЦ ПМБ – 300-400 г.
Качество питательных сред производства ГНЦ ПМБ не уступает импортным аналогам по всем параметрам, а по некоторым показателям и превосходит их. В частности, тест-штаммы лактозоположительных бактерий на питательной среде Эндо ГРМ имеют яркий малиновый цвет с выраженным металлическим блеском и как следствие четкую дифференциацию энтеробактерий. Стоимость отечественных препаратов ниже импортных, что позволяет рекомендовать их к использованию при все возрастающем количестве проводимых анализов. (См. тезисы: Шепелин А.П. с соавт. “Сравнительный анализ качества питательных сред различных производителей для выделения энтеробактерий”).
«Клин. лаб. диагностика», 2011, № 9, с. 42.
Источник
Среда эндо дифференциально диагностическая среда для выращивания энтеробактерий
1. Среда Эндо. Среда предназначена для выделения из клинического и другого материала патогенных бактерий кишечной группы.
Состав:
Агар мясопептонный — 1000,0 мл
Лактоза — 10,0 г
Фуксин основной, спиртовой насыщенный раствор — около 10,0 мл
Натрия сульфит (Na2SO3), 10%-ный водный раствор — 100,0 мл pH 7,4
Мясопептонный агар расплавляют, устанавливают pH до 7,4 и охлаждают до 70°С. В горячий растопленный агар добавляют 10,0 г лактозы, предварительно растворенной в стерильной дистиллированной воде и прокипяченной.
В отдельных колбах приготовляют:
— 10,0 мл спиртового насыщенного раствора основного фуксина;
— 100,0 мл 10%-ного водного раствора сульфита натрия.
К раствору сульфита натрия малыми дозами доливают раствор основного фуксина до тех пор, пока он не приобретет бледно-розовый цвет.
Приготовленную смесь вливают в 1000,0 мл растопленного агара, хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри. Готовая среда имеет бледно-розовый цвет. Среду желательно готовить в день ее использования.
Сульфит натрия и основной фуксин оказывают подавляющее действие на большинство грамположительных микроорганизмов и одновременно служат индикаторной системой.
Грамотрицательные бактерии кишечной группы, способные ферментировать лактозу в зоне своего роста, смещают pH среды в кислую сторону вследствие образования конечного продукта расщепления — ацетилальдегида. Последний, реагируя с сульфитом натрия, способствует восстановлению фуксина с появлением красного окрашивания, поэтому лактозоположительные бактерии вырастают в виде ярко-розовых и красных колоний, часто с металлическим блеском.
Колонии бактерий, не сбраживающих лактозу, образуют на этой среде прозрачные, бесцветные колонии, иногда с розовым оттенком.
В приготовлении среды большое значение имеет качество сульфита натрия. Он должен быть безводным, поэтому хранят его в герметически укупоренной посуде. Если сульфит некристаллический, его надо перекристаллизировать или прокалить в сушильном шкафу. В последнем случае сульфит приобретает вид аморфного порошка, хорошо сохраняется, но для приготовления среды берут 20%-ный раствор.
2. Агар с эозином и метиловым синим (среда Левина, ЭМС-агар). Агар с эозином и метиленовым синим Левина рекомендован для выделения энтеробактерий, включая колиформные микроорганизмы.
Состав:
Агар мясопептонный — 1000,0 мл
Лактоза (или сахароза) — 20,0 г
Метиленовый синий, 0,5%-ный водный раствор — 20,0 мл
Эозин желтый (эозин натрий, бактериологический),
2%-ный водный раствор — 15,0 мл
Калия гидрофосфат (K2HPO4*3H2O) — 2,0 г
pH 7,3±0,1
К 1000,0 мл расплавленного МПА добавляют последовательно 20.0 мл раствора метиленового синего, предварительно подогретого на водяной бане, 15.0 мл эозина желтого, 20,0 г лактозы (или сахарозы) и 2,0 г калия гидрофосфата. Растворы красок готовят на дистиллированной воде, стерилизуют текучим паром в течение 1 ч и используют по мере надобности.
Углевод и калия гидрофосфат перед добавлением к агару разводят в небольшом количестве стерильной дистиллированной воды и кипятят в пробирке.
После добавления всех ингредиентов среду перемешивают и стерильно разливают в чашки Петри. Среда имеет красно-фиолетовый цвет.
Основным дифференцирующим фактором является способность среды изменять pH под действием кислоты, образующейся при ферментации бактериями лактозы или сахарозы. Комплекс индикаторов (эозин и метиленовый синий) выпадает в осадок при pH 4,7, окрашивая колонии кислотообразующих бактерий в темный сине-фиолетовый, почти черный цвет, часто с зеленым блеском.
Бактерии, не ферментирующие углеводы, входящие в состав среды, образуют бесцветные или розоватые колонии.
Коммерческий ЭМС-агар выпускают в сухом виде. Состав и способ приготовления среды указаны на этикетке.
3. Бактоагар «Ж» Плоскирева, сухой. Состав, г/л:
Гидролизат кильки панкреатический — 16,0
Натриевые соли желчных кислот — 8,1
Лактоза — 7,6
Натрия фосфат двузамещенный — 2,25
Натрия цитрат — 8,82
Натрия тиосульфат — 6,86
Йод металлический — 0,12
Натрия карбонат — 1,42
Нейтральный красный — 0,04
Бриллиантовый зеленый — 0,02
Агар микробиологический — 8,75
pH 7,2±0,1
Навеску препарата, указанную на этикетке, растворяют в 1000,0 мл дистиллированной воды. Кипятят 1-2 мин до полного расплавления агара, разливают в чашки Петри слоем 4,0-5,0 мм и оставляют чашки приоткрытыми на 40-50 мин при температуре 20-25°С для застудневания и подсушивания содержимого.
Готовая среда коричнево-красноватого цвета. В состав среды входят ингибирующие вещества: натриевые соли желчных кислот, йод, бриллиантовый зеленый, подавляющие рост грамположительных микроорганизмов, задерживающие в первые сутки культивирования рост Echerichia coli и колиформных бактерий, подавляющие роение протея.
Дифференцирующие свойства среды основаны на изменении pH в кислую сторону при росте лактозоферментирующих бактерий, образующих колонии брусничного цвета (индикатор — нейтральный красный).
Лактозоотрицательные бактерии растут в виде бесцветных или слабоокрашенных колоний.
Ростовые свойства среды недостаточны для роста S. dysenteriae и некоторых сальмонелл (S. choleraesuis, S. pullorum).
4. SS-arap (сухой). Среда предназначена для селективного и дифференциального выделения сальмонелл и шигелл.
Состав:
Гидролизат рыбной муки панкреатический — 16,0 г
Экстракт дрожжей пекарских — 5,0 мл
Желчь очищенная сухая — 7,5 г
Натрия тиосульфат Na2S2O3 — 10,0 г
Железа (III) цитрат — 1,0 г
α-D-лактоза — 10,0 г
Нейтральный красный — 0,04 г
Бриллиантовый зеленый — 0,00033 г
Агар — 10,0 ±2,0
pH 7,1 ±0,2
Навеску сухой среды, указанную на этикетке, тщательно размешивают в 1000,0 мл дистиллированной воды. Смесь при периодическом помешивании нагревают до кипения. Кипятят в течение 3 мин, до полного расплавления агара. Затем среду охлаждают до 45-50°С и разливают в нестерильные чашки Петри слоем 5,0-6,0 мм. Оставляют для застудневания агара, полуприкрыв крышками на 15-20 мин для подсушивания. Перед посевом чашки со средой подсушивают на рабочем столе с открытыми крышками в течение 90-100 мин при температуре 18-25°С.
На SS-агар можно сеять непосредственно фекалии, материал с ректальных тампонов и другой клинический материал, подозрительный на содержание патогенных энтеробактерий. Параллельно рекомендуется производить высев на чашки с менее сильным ингибиторами, например, на дезоксихолат-цитратный агар, для облегчения выделения шигелл.
Учет результатов проводят через 18 —20 ч инкубации при 36-38°С. Лактозоотрицательные патогенные и условно-патогенные энтеробактерии образуют на SS-агаре бесцветные колонии диаметром 1,0-2,0 мм в S-форме в течение 18-38 ч инкубации в термостате. Лактозоположительные условно-патогенные энтеробактерии образуют колонии диаметром 1,5-2,5 мм малинового цвета в S-форме. Штаммы, продуцирующие сероводород, образуют колонии с темным центром. Коммерческая среда выпускается отечественными и зарубежными фирмами.
5. Дезоксихолатный агар с бромкрезоловым пурпурным (агар ДБКП), HiMedia, B.C.P.-Deoxycholate Agar. Агар ДБКП является дифференциальной питательной средой, содержащей лактозу и сахарозу; предназначена для выделения грамотрицательных энтеробактерий, не ферментирующих лактозу и/или сахарозу.
Состав, г/л:
Триптон — 7,5
Пептон — 7,5
Лактоза — 10,0
Сахароза — 10,0
Экстракт дрожжевой — 2,0
Натрия цитрат — 2,0
Натрия дезоксихолат — 1,0
Натрия хлорид — 5,0
Агар — 14,0
Бромкреозоловый пурпурный — 0,02
pH 7,2±0,2
Суспендируют 59,0 г среды в 1000,0 мл дистиллированной воды. Нагревают до кипения. Затем продолжают нагрев до полного растворения частиц. Если среду предполагается использовать в тот же день, стерилизации не требуется. Если среда подлежит хранению, ее стерилизуют автоклавированием при 121°С в течение 15 мин. Среду охлаждают до 55-60°С, а затем разливают в чашки Петри. Колонии, не ферментирующие лактозу и/или сахарозу, — прозрачные, бесцветные или голубоватые. Кишечные палочки, ферментирующие оба углевода, образуют желтые матовые колонии, окруженные зоной деоксихолатного осадка.
6. Дезоксихолат-цитратный агар с лактозой и сахарозой, HiMedia, В.С.Р. — D.C.L.S. Agar. Среда предназначена для выделения шигелл и сальмонелл, включая группу Arizona, может быть использована для выращивания S. pullorum и S. gallinarum.
Состав, г/л:
Перевар животной ткани пептический — 5,0
Гидролизат казеина — 5,0
Экстракт дрожжевой — 3,0
Экстракт мясной — 3,0
Лактоза — 7,5
Сахароза — 7,5
Натрия цитрат —10,0
Натрия хлорид — 5,0
Натрия тиосульфат — 5,0
Натрия дезоксихолат — 2,5
Бромрезоловый пурпурный — 0,02
Агар — 14,0
pH 7,2±0,2
Смесь перечисленных ингредиентов в количестве 67,5 г суспендируют в 1000,0 мл дистиллированной воды. Кипятят, активно помешивая до полного растворения частиц. Не стерилизуют и не перегревают! Охлаждают до 45°С и разливают в чашки Петри.
Готовая среда имеет лиловую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует. Питательные вещества в среде содержатся в таких компонентах, как пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, мясной экстракт. Сахароза и лактоза являются ферментируемыми сахарами. Колонии колиформных бактерий и протеев, быстро ферментирующих сахарозу и/или лактозу, становятся желтыми (индикатор бромкрезоловый пурпурный). Это позволяет легко отличить их от почти бесцветных колоний шигелл и сальмонелл.
Цитрат и дезоксихолат подавляют рост колиформных и грамположительных микроорганизмов.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 27.2.2020
Источник
Среда Эндо
Среда Эндо — дифференциально-диагностическая питательная среда, предназначенная для выделения Esherichia coli. Названа по имени предложившего её японского бактериолога Сигеру Эндо (1869—1937). Обладает слабыми селективными свойствами, компоненты среды подавляют рост грамположительных бактерий.
Содержание
Состав
Принцип действия
Фуксин обесцвечивается сульфитом натрия (образуется бесцветная фуксинсернистая кислота — реактив Шиффа [1] ). Энтеробактерии, сбраживающие лактозу, в процессе брожения выделяют муравьиную кислоту, которая даёт цветную реакцию с реактивами на альдегиды, в том числе и с фуксинсернистой кислотой с образованием свободного фуксина, в результате чего их колонии окрашиваются в малиново-красный цвет с металлическим блеском или без него. Колонии бактерий, не сбраживающих лактозу, имеют белый или слабо-розовый цвет (цвет питательной среды).
См. также
Примечания
Ссылки
Wikimedia Foundation . 2010 .
Полезное
Смотреть что такое «Среда Эндо» в других словарях:
Среда эндо — … Википедия
питательная среда Эндо — см. Эндо среда … Большой медицинский словарь
Эндо агар — плотная дифференциально диагностическая среда, используемая для выделения и первичной идентификации энтеро бактерий. Выпускается в готовом виде. Состоит из питательного агара, лактозы, основного фуксина, натрия сульфита и натрия фосфата. Э.а.… … Словарь микробиологии
Эндо среда — (S. Endo, 1869 1937, японский бактериолог) плотная дифференциально диагностическая питательная среда для выделения патогенных энтеробактерий, содержащая мясопептонный агар, лактозу и насыщенный основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия … Большой медицинский словарь
Пита́тельная среда́ — ( ые) ( ы) искусственный субстрат, представляющий собой сбалансированную смесь питательных веществ в концентрациях и сочетаниях, необходимых для роста и деления микроорганизмов или клеток высших организмов. Питательная среда Адамса см. Адамса… … Медицинская энциклопедия
Рапопорт среда — среда обогащения, применяемая для выделения сальмонелл из крови. Для ее изготовления к 10% желчному бульону с рН 7,2 добавляют 2% глюкозы (предварительно разведенной в 5 мл дистил. воды) и 1% индикатора Андраде (или 0,1% бром крезолового… … Словарь микробиологии
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ — ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало… … Большая медицинская энциклопедия
Анаэробные организмы — Аэробные и анаэробные бактерии предварительно идентифицируются в жидкой питательной среде по градиенту концентрации O2: 1. Облигатные аэробные (нуждающиеся в кислороде) бактерии в основном собираются в верхней части пробирки, чтобы поглощать… … Википедия
Посев (микробиология) — У этого термина существуют и другие значения, см. Посев. Культура микобактерий на яичной среде Левенштейна Йенсена … Википедия
САХАР — САХАР, углевод сладкого вкуса, имеющий широкое распространение в качестве питательного и вкусового вещества. Из различных видов С. наибольшее пищевое значение имеют: тростниковый (сахароза, свекловичный), виноградный (глюкоза, декстроза),… … Большая медицинская энциклопедия
Источник