Среда для выращивания клубеньковых бактерий
СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, содержащая мелассу , источник органического азота и физиологически активных веществ, сернокислый а1.1моний, фосфорнокислый однозамещенный калий, фосфорнокислый двузамещенный калий, сернокислый магний, мел и чоду отличающаяся тем, что, с целью стандартизации среды и повышения титра клубеньковых бактерий, в качестве источника органического азота и физиологически активных веществ среда содержит сухой ферментолизат кормовых дрожжей, полученный с помощью ферментного препарата из Actinomyces rutgersensis 88, при следующем соотношении компонентов , г/л: Меласса20,0-30,0 Сернокислый аммоний0,5-1,0 Фосфорнокислый5J однозамещенный (Л калий0,25-0,5 Фосфорнокислый двуз амещенный калий0,25-0,5 Сернокислый магний 0,2-0,3 Мел1,0-3,0 Сухой ферментолизат кормовых дрожжей 2,0-5,0 ВодаОстальное
H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ вой и Ь v 1 r д ;»0,5-1,0
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ХОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3471434/30-15 (22) 19.07.82 (46 ) 30. 06. 84. Бюл . Р 24 (72) Е. В. Чекасина, A. П. Ужкуренас, A. f3. Хотянович, A. И. Позднякова, А. П.Шпокене, Н. Ю. Амстердамская, В. И. Шрамко, A. И. Черемухина и В.С.Краснопольская (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии, Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов и Всесоюзный научно-исследователь» ский институт прикладной энзимологии (53) .576. 851. 155 (088. 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР
9 540852, кл. С 12 И 1/20, 1976.
2. Авторское свидетельство СССР
9 293785, кл. С 05 F 11/00, 1972. ! (54) (57) СРЕДА ДЛЯ ВЫРИЦИВАНИЯ КЛУ
БЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЯ, содержащая мелассу, источник органического азота и физиологически активных веществ, сернокислый аммоний, фосфорнокислый,.S0ÄÄ 1100307 А однозамещенный калий, фосфор нокислый двузамеще нный калий, сернокислый магний, мел и воду о т л и ч а ющ а я с я тем, что, с целью стандартизации среды и повышения титра клубеньковых бактерий, в качестве источника органического азота и физиологически активных веществ среда содержит сухой ферментолиэат кормовых дрожжей, полученный с помощью ферментного препарата иэ Actinomyces rutgersensis 88, при следующем соотношении компонентов, г/л:
Фосфорнокислый однозамещенный калий О, 25-0, 5
Фосфорнокнслый двузамещенный калий 0,25-0,5
Сернокислый магний 0,2-0,3 ф
Сухой ферментолизат кормовых дрожжей IaeaL
Изобретение относится к сельскохозяйственной и технической микробиологии и может быть использовано прй производстве йнокулянтов для бобовых культур.
В связи с расширением производства препаратов клубеньковых бахтерий в СССР. возникает необходимость изыскания рациональных питательных сред для культивирования клубеньковых бактерий с использовайием доступных и стандартных субстратов, Обеспечи:вающих получение высоких титров клубеньковых бактерий в едийице объема ферментационной жидкости. В настоящее время в качестве источника органического азота и физио» логически активных веществ дЛя выращивания клубеньковых бактерий в производственных условиях используют различные экстракты. 20
Известна питательная среда, содержащая в качестве источника органического азота и физиологически ак» тивных веществ бобовый н дрожжевой экстракты. Однако они представляют 25 собой нестандартные продукты: помимо. того, стоимость их довольно высока 1Х
Известна среда, содержащая в указанном качестве кукурузный экстрак1 2).
Однако он также не является стан- 30 дартным продуктом, что исключает возможность получения стандартизированной (по органическому азоту) питательной среды. Кроме того, в кукурузном экстракте содержатся летучие 35 органические кислоты, ингибирующие рост клубеньковых бактерий, что препятствует накоплению максимального их титра. Кукурузный экстракт является сравнительно дефицитным сырьем, 40 и поиск его заменителей актуален.
Целью изобретения является стандартиз.ация среды и повышение титра Клубеньковых бактерий.
Поставленная цель достигается тем, что среда для выращивания клубеньковых бактерий, содержащая ме» лассу, источник органического азота и физиологически активных веществ, сернокислый аммоний, фосфорнокислый однозамещенный калий, фосфорнокислый 50 двузамещенный калий, сернокислый магний, мел и воду, в качестве источ- ника органического азота и физиологически активных веществ содержит сухой ферментолизат кормовых дрожжей 55. полученный с помощью ферментного препарата из Actinошусеи rutgersensiв
88, при следующем соотношении компонентов, r/ë:
Меласса 20, 0-30, О 60
Сер нокислый аммоний 0,5-1,0
Фосфорнокислый однозамещенный калйй 65
Фосфорнокислый двузамещенный калий О, 25-0,5
Сер нохи слый магний 0 2-0 3
Сухой ферментолизат кормовых дрожжей 2,О-5,0
Культивирование медленно растущих клубеньковых бактерий сои и люпина и быстрорастущих клубеньковых бактерий гороха и люцерны.
П р и м е.р 1. Культуру клубеньковых бактерий сои (шт. 646) выращивали в жидкой питательной среде состава, r/ë: меласса 20,0„ серно« кислый аммоний 0,5; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,5; фосфорнокислый двузамещенный калий 0>5; сернокислый магний 0,2; мел 2,0; (ферментолизат ВВК 5,0. Выращивали клубеньковые бактерии сои в колбах и бутылях с 2,0 л питательной среды на качалке при 220 об/MHH при 28-30″С и течение 72 ч. Получили титр в культуральной жндкостн 26,3 млрд/мл бактерий. В контрольной среде (с ку-. курузным экстрактом титр был
17,7 млрд/мл бактерий.
П р и М е р 2. Культуру клубеньковых бактерий люпнна (шт. 363а) выращивали в жидкой питательной среде состава, г/л: меласса 30,0; сернокислый аммоний 1,0„ фосфорйокислый однозамещенный калий 0,5; фосфорно» кислый двузамещенный калий 0,5 сернокислый магний 0,2; мел 1,5 Ферментолизат ВВК 3,0. Выращивание культуры проводили в колбах и бутылях с
2,0 л питательной среды на качалке при 220 об/Мин при 28-30 С в течение 90 ч. Получили титр в культуральной жидкости 23,0 млрд/мл бактерий, в контрольной среде титр был
15, 8 млрд/мл бактерий.
Пример 3, Культуру клубеньковых бактерий гороха (шт,250а) выращивали в жидкой питательной среде состава, r/ë: меласса 30,0; сернокислый аммоний 0 5; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,25; Фосфорнокислый двузамещенный калий 0,25 сернокислый магний О;2; мел 3,0
Ферментолизат БВК 4,0. Выращивали клубеньковые бактерии гороха в колбах и бутылях с 1,5 л питательной среды а также в ферментаторах в течение 28-42 .ч при 28-30 С. Получили титр в культуральной жидкости
19,7 млрд/мл, в кольитрольной среде (с кукурузным экстрактом) титр был
12,5 млрд/мл бактерий гороха.
П р и.м е р 4. Культуру клубеньковых бактерий люцерны (шт. 425a ) выращивали в жидкой питательной среде состава, г/л: меласса 20,0; сер1100307
Редактор Т. Веселова ТехредС. Мигунова Корректор А.Ильин
Заказ 4543/23 Тираж 522, Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП «Патент» r.Óærîðîä, ул. Проектная, 4 нокислый аммоний 1,0g фосфорнокислый одноэамещенный калий 0,25; фосфорнокислый двуэамещенный калий
0,25; сернокислый магний 0,3; мел
1 0> ферментолизат БВК 2,0. Выращивание культуры клубеньковых бактерий люцерны проводили .в колбах и буты- . лях с 1,5 л питательной среды на качалке при 220 об/мин при 28-30 С в о течение 30-40 ч а также в ферментаторах. Получили титр в культуральной жидкости 38 млрд/мл, в контрольной среде титр был 19,8 млрд/мл бактерий люцерны.
Применение изобретения позволяет повысить титр клубеньковых бактерий
Источник
Питательная среда для выращивания клубеньковых бактерий
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, включающая источники углерода, азота , минеральные соли, ростовые вещества , стабилизатор рН и воду, о тличающаяся тем, что, с целью обеспечения возможности выращивания на ней быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий , а также повышения их титра, в качестве источника углерода, азота , минеральных солей и ростовых веществ она содержит сапропель, а в качестве стабилизатора рН — углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество)0,5-2,5 Углекислый кальций 0,01-0,05 ВодаОстальное
(19) (11) СОЮЗ СОВЕТСКИХ
4 (51) С 12 N 1/06
H АВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТН СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTMA (21) 3595533/30-15 (22) 20.05.83 (46) 15.02.85. Бюл. Ф 6 (72) Н.И.Мильто, А.И. Карбанович, М. 3. Лопотко и П.Л. Куз ьмицкий (71) Институт микробиологии AH БССР и Институт торфа АН БССР (53) 631.461.52(088.8) (56) 1. Кронгауз Е.А. и др. Использование мелассы в питательной среде для клубеньковых бактерий. Микрои биологическая промышленность, 1971
2. Методы исследования клубеньковых бактерий. Методические рекомендации, 1981, с. 36 (прототип). (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, включающая источники углерода, азо» та, минеральные соли, ростовые вещества, стабилизатор рН и воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью обеспечения возможности выращивания на ней быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий, а также повышения их титра, в качестве источника углерода, азота, минеральных солей и ростовых веществ она содержит сапронель, а в качестве стабилизатора рН вЂ” углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:
Сапропель (в расчете на сухое вещество) О, 5-2,5
Углекислый кальций 0,01-0,05
Изобретение относится к микробиологической промышпенности, а именно к средам для культивирования к1Губеньковых бактерий при производстве препаратов клубеньковых бактерий, применяемых для инокуляции бобовых культур.
Известна среда для культивирования быстро и медленнорастущих клубеньковых бактерий, содержащая ис- !О точники углерода, фасолевый отвар и минеральные соли 13.
Однако указанная среда обеспечивает относительно низкий титр клубеньковых бактерий, является дорогостоящей и многокомпонентной.
Известны также питательные среды, содержащие кукурузный экстракт, дрожжи, глюкозу, мелассу, минеральные соли, стабилизатор рН, исполь- 20 эуемые для получения рабочей культуры быстрорастущих (БКБ) и медленнорастущих (МКБ) клубеньковых бактерий при производстве ризоторфина(23.
Недостатками известных сред являются высокая стоимость сред, обусловленная использованием дорогостоящих ингредиентов — глюкозы, пищевого сахара, мелассы, кукурузного экстракта и минеральных солей, различный состав сред для выращивания БКБ и
МКБ, а также раздельная стерилизация углеводов и остальных компонентов,сред, что не позволяет унифицировать процесс их приготовления, низ35 кий титр клеток клубеньковых бактерий 0,8 — 10″ — 1,5 10″ в 1 мл, достигаемый при выращивании БКБ в течение 36-48 ч, MKB — 72-96 ч.
Целью изобретения является обес40 печение возможности культивирования быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий и повышение их жтра.
Для достижения цели питатель45 ная среда для выращивания клубеньконых бактерий, включающая источники уг ерода, азота, минеральные соли, ро товые вещества, стабилизатор рН и воду, в качестве источника углерода, азота, минеральных солей и ростовых веществ содержит сапропель, в качестве стабилизатора рН— углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5-2,5
Углекислый кальций 0,01-0,05
После стерилизации рН для
БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.
Элементный состав органической массы сапропелей сравнительно постоянен, Содержание углерода колеблется от 52 .до 56Х, азота — от 3,5 до 6,0Х на органическую массу. Зольность до 30%. Сапропели богаты всеми биогенными макро- (N;P,Ê,Ca,Mg,$) и микроэлементами (Zn В,Cu Со, Mo,Ni и др.). Органические сапропе-, ли содержат 18-52% легкогидролиэуемых веществ, различные витамины, обладают высокой дисперсностью и влагоемкостью.
Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5
Вода водопроводная До 1:00,0 рН (после стерилизации) для
БКБ 6,8-7,0, а для МКБ 6,2-6,5.
Среду стерилизуют в автоклаве при
1=121 С в течение 1 ч. Питательную среду засевают суспензией клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а (БКБ) и суспензией клубеньковых бак— терий сои, штамм 629 а (МКБ). Возраст посевного материала 3-е суток для БКБ и 7 суток для МКБ. Исход-, ный титр — 5 0 10 клеток в t мл.
Культивирование бактерий ведут в колбах емкостью 750 мл с 200 мл питательной среды на качалке со скоростью 200 об/мин при 1 28 С в течение
2 сут для БКБ и 4 сут для МКБ. Титрколичество жизнеспособных клеток определяют известным методом.
Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 9,0 10зклеток/мл питательной среды, В
Титр клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, составляет 2,9 -109клеток/мл.
Пример 2. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%:
Сапропель (в расчете на сухое вещество) 1,0
Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации для
БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.
Далее как в примере 1.
Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 1,3 10 клубеньковых бактерий, а сои, штамм 629 а — 2,5 10″ . 39750
Техред Л. Коцюбняк Корректор А. Ильин
Тираж 525 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 з
Пример 3, Готовят питательную среду следующего состава, мас.%:
Сапропель (в расчете на сухое вещество) 2,5
Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для
БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6 5.
Далее. как в примере 1.
Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 9,1 ° 10 0, титр клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, — 1,2 tO клеток в 1 мл питательной среды.
Среду можно использовать как с нативным сапропелем, так и гидролизованным, что приводит к повышению титра клубеньковых бактерий в. 1,3-2,0 раза.
Пример 4. Готовят пительную среду .следующего соства, мас.%:
Гидролизованный сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5
Вода водопроводная До 100 0 рН (после стерилизации) для
БКБ 6,8-7,00, для МКБ 6,2-6,5.
Гидролиз сапропеля, входящего в состав среды, проводят 1%-ной соляной кислотой (22,6 мл НС1 уд.вес
i, 19 на 1 л среды) путем автоклавирования при 121 С в течение 30 мин. ,После автоклавирования.среду, нейтрализуют 0,1 н. раствором NaOH до
,указанных показателей рН и снова стерилизуют в автоклаве при 121 С в течение 30 мин. Далее как в примере 1.
Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250. а, составляет
1,2 10 клеток в мл питательной сре1О ды, клубеньковых бактерий сои, 5 штамм 629 а. — 4,!»»10 .
Пример 5. Готовят питатель.ную среду следующего состава, мас.%:
Гидролизат сапропеля-(в расчете на сухое вещество) 1,0
Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для
БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.
Далее как в примере 4.
Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет
2,6 10″», клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а — 4,8 0″ .
Пример 6. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%:
Гидролизат сапропеля (в расчете на сухое вещество) 2,5
Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для
БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5.
Далее как в примере 4.
Титр клубеньковых бактерий гороха штамм 250 а, составляет 1,3 10, клубеньковых бактерий сои, штамм
629 а — 1,9 .101 Предлагаемая питательная среда по сравнению с известными имеет сле35 дующие преимущества: пригодность для выращивания как БКБ, так и МКБ,, снижение себестоимости питательной среды в 70 раз.
Источник