Размножение растений в пробирках ин-витро (in-vitro), укоренение, адаптация, время, раствор
Размножение растений в культурах ин-витро (микроразмножение) означает способ размножения в искусственных, асептических условиях (в стекле). Представления микроразмножения является теория заложенная, когда каждая клетка растения покрытосеменных скрывает переданные через ядро и цитоплазму свойства, которые в определенных условиях делает возможным восстановление целого организма, отвечающему целому материнскому растению. Размножение ин-витро растений садовых, древесных, проходит примерно как растений зеленых, однако достижение свойств размножение является более сложным. В процессе розмнажения можно выделить четыре этапа.
Этап первый и второй. Оздоровление и размножение.
Материалом для размножения, используются растения свободные от болезней, зачастую с помощью термотерапии, после зимнего отдыха берут верхушечный побег растения. Стерилизацию поверхности проводят с помощью смеси из (50% алкоголя и 0,1% хлорки (хлорид ртути) ). Для размножения используют верхушечный побег 0,3-0,8 мм, для смеси чаще всего используют работы Мурашига и Кога, с добавлением цитокинина BAP (бензиламинопурина), стимулятора роста и образователя новых побегов. В первом этапе растения содержаться 3-4 недели, создаются несколько дополнительных побегов. Состав Мурашига и Кога таков: (в мг/л)
| NH4NO3 -1650 KNO3 -1900 CaCl2 * 2H20 -440 MgSO4 *7H20 -370 KH2PO4 -170 | Na2EDTA * 2H20 -37,2 FeSO4 * 7H20 -27,8 MnSO4 * 4H20 -22,3 сахароза -20 000 глицин -2,0 | гидролизат казеина – 1000 мезо-инозитол -100 кислота никотиновая -0,5 перидоксина-HCl -0,5 тиамин-HCl -0,1 |
Субтракция пробуждает рост и образование боковых побегов. Для получения хороших приростов размножения нужно использовать хорошие термично-освещенные условия. Интенсивность осветления должна быть около 1000 люксов (1000 люмий на квадратный метр), а температура воздуха от 21 до 25 градусов Цельсия саженцы одесса. Температура выше 30 гр приводит к быстому старению материала и уменьшению продуктивности.
Этап второй. Укоренение.
Для укоренения в пробирках используют молодое растения с хорошо образовавшимися листьями, длиной около 2 см. Для укоренения используют стимуляторы корнеобразования на основе ауксина.
Типы использования различных ауксинов (NAA, IAA или IBA) считается самым лучшим раствором с содержанием от 0,5 до 2 мг на литр раствора. Перебор укоренителя вызывает образование калиуса и затруднение образование корней. Хорошему укоренению растений способствует интенсивность света и уменьшение минеральных солей, добавление витаминов, B1, B2, B6, кислоты никотиновой и аскорбиновой.
Этап четвертый. Адаптация растений из пробирки в теплицу.
Этап этот является решающим при микроразмножении. Перенесение растений из стекла в теплицу означает изменение роста. Следует обеспечить им высокую влажность, требуемую температуру. Растения размножаемые в ин-витро следует защитить от паразитов, и скачков температуры. Грунт для посадки должен быть легким и свободным от болезней. Для субстрата лучше использовать торф верховой с необходимой кислотностью, освободить его от микроорганизмов можно с помощью термической обработки. Для дезинфекции лучше использовать фунгицид Топсин с добавлением Алиет. Рост растений можно ускорить с помощью опрыскивания препаратором цитокинина 0,5-2 мг на литр непосредственно по посадке, а второй этап можно повторить через две недели. Спустя 8 недель растения вырастают на высоту от 10 до 20 см, после этого их можно садить в питомник (однако не позже чем второй половины июля), или оставить их в теплице в горшках до второй половины весны.
Размножение растений в ин-витро, есть в практике несколько десятков лет. Большое значение в этом способе является быстрое размножение растений за короткое время, а также выращивание их без вирусов. С одной почки растения можно вырастить несколько тысяч растений.
Источник
Производство растений in vitro и in vitro Н.У.
Выращивание микрорастений в стандартизированных условиях обеспечивает высокую степень однородности посадочного материала между различными партиями, что дает возможность нашим клиентам более точно планировать объемы и сроки посадок.
Герметичная пластиковая тара и питательный субстрат, в котором выращиваются микрорастения, дают возможность транспортировки продукции на дальние расстояние с сохранением жизнеспособности и посадочных качеств микрорастений, что подтверждается широкой географией наших постоянных клиентов. Компактность упаковки и небольшой вес контейнеров значительно уменьшают транспортные расходы.
Особенности данного способа размножения позволяют в сжатые сроки получать омоложенный оздоровленный посадочный материал как старых, но не теряющих свою актуальность, сортов так и селекционных новинок.
Основной сложностью при работе с микрорастениями является процесс их адаптации к естественным условиям. Проведение адаптации микрорастений требует определенных навыков и наличия теплиц для первичного доращивания растений in vitro. Адаптация производится в условиях повышенной влажности и с применением других специальных мер по уходу (см. рекомендации по посадке и уходу здесь). Требуемые условия необходимо соблюдать в первые 3-5 недель (в зависимости от вида растений) после высадки микрорастений в субстрат. Допустимый выпад (гибель) микрорастений при соблюдении оптимальных условий адаптации составляет 5 – 10% в зависимости от культуры и сорта.
Ключевым потребителем продукции категории «микрорастения in vitro» являются тепличные хозяйства, располагающие зимними отапливаемыми теплицами (агрофирмы, тепличные комбинаты, питомники, фермерские хозяйства и т.д.).
Также мы производим микрорастения флоксов in vitro неукоренненные — in vitro Н.У.
В этой категории мы предлагаем микрорастения флоксов in vitro н/у для непосредственной высадки в теплицу.
Совмещение стадий укоренения и адаптации микропобегов флоксов открывает возможность увеличения эффективности производства для этой культуры и позволяет значительно сократить сроки получения готовых растений.
Особенности этой категории растений:
Источник
Современные биотехнологии. Растения in vitro.
Уважаемые форумчане, хочу предложить вам обсудить тему применения современных биотехнологий в растениеводстве вообще и садоводстве в частности. Мне интересно ваше мнение об использовании растений полученных методом микроклонального размножения in vitro. Какие вы видите плюсы и минусы таких растений? Готовы ли вы использовать такие растения для закладки промышленных плантаций? Есть ли у вас какие-либо опасения относительно использования таких технологий? Желаете ли вы участвовать в формировании требований к растениям и сортам, которые нужно быстро и массово размножать для промышленного использования. Нужно ли сообща создавать реестр таких растений и сортов?
По ходу обсуждения я готов отвечать на вопросы в объеме своих знаний и консультаций с профильными специалистами в этой области.
Заранее всех благодарю.
Да, собственно, что тут обсуждать. Безвирусный материал — это прекрасно и здорово. Но очень дорого и качественный материал из пробирки слишком сложно достать. Надеюсь, мы всерьез не рассматриваем вариант покупки у лабораторий-однодневок. Как следствие, завозить из Англии, Голландии, может, Польши при нынешнем курсе нацвалюты дороговато будет. Себе это могут позволить только серьезные ребята для закладки маточника.
PS Давайте народ не пугать современными разработками) Даже у нас в 70-е они активно использовались)
С уважением, Алексей.
Уважаемый Алексей (Sweb)! Мне видится из центрального региона РФ несколько иначе, чем Вам из Крыма. Ничего личного, просто я смею думать, что мне, человеку, увлеченному и работающему с растениями в московском регионе около 25 лет, известно больше, чем Вам о развитии росийской биологической науки. Мы прекрасно знаем, что микроклональное размножение растений широко применяется в США, Голландии, Польше, Франции, Японии, Таиланде, но и в России также накоплен большой опыт по меристемному размножению важных для сельского хозяйства видов растений. Практически во всех российских научно-исследовательских институтах и селекционных центрах созданы лаборатории для микроклонального размножения и оздоровления селекционного материала. Вот краткий перечень заведений, со специалистами которых привелось лично мне общаться: из академических это Институт физиологии растений (ИФР) в котором в 1957 году по инициативе академика А.Л. Курсанова Раисой Георгиевной Бутенко были начаты исследования по новому для СССР направлению физиологии растений – культивированию клеток и тканей растений вне организма, Институт медико биологических проблем (ИМБП), Института биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова, Главный ботанический сад им. Н.В. Цицина Российской академии наук (ГБС РАН), Тимирязевская сельскохозяйственная академия, Биологический факультет МГУ, Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного хозяйства имени А. Г. Лорха (ВНИИКХ),Всероссийский селекционно-технологический институт садоводства и питомниководства (ВСТИСП) – признанный лидер в области биотехнологии садовых растений. Работа по культуре изолированных тканей и органов была начата в институте в 60-е годы ХХ века. Российский университет дружбы народов (РУДН). А еще масса отраслевых институтов, мощнейшее Сибирское отделение Российской академии наук с двенадцатью биологическими институтами. Относительно недавно меристемные технологии начали применяться крупными питомниками растений и сельхозпредприятиями. Есть меристемные лаборатории практически во всех биологических институтах Украины, в Киеве есть такая меристемная лаборатория МПП «Апекс». Следует признать, что в России наиболее широкое применение меристемная технология пока нашла в получении семенного картофеля супер супер элита. Страну в первую очередь нужно было накормить. Советские ученые в отличие от западных были ограничены в практических исследованиях, так как темы указывала тогда «руководящая и направляющая сила общества -КПСС», а вот фундаментальные биологические исследования были на мировом уровне. Недаром почти половина моих знакомых биологов работают нынче в Европе и Америке. Отсталые незнайки там не нужны. Прошу прощения за такое вступление, но очень меня задел Ваш пессимизм. Меристемные лаборатории в России есть, они готовы работать и выдавать на-гора миллионы клонов культурных растений. И эти лаборатории не однодневки! Нынешнее экономическое состояние страны, на мой взгляд, только положительно скажется на развитии отечественной прикладной биологии, сельскохозяйственного производства и взаимной кооперации отечественных производителей. При таком рубле наша, фермерская продукция, имеет все предпосылки стать конкурентноспособной. Пока — на нашем внутреннем рынке. Логически мы подошли к вопросу цен, причем, цен сегодняшнего дня. Давайте сообща исследуем этот вопрос. Свое отношение к ценам я попытаюсь доказательно сформулировать в следующем своем посте.
По формулировке Вашего вопроса я могу предположить, что словом «обеззараживание»
Добрый день,Московский фермер .
Отвечу в этой теме.
Я имел в виду, что есть способы размножения «в стекле» при которых размножают не очищенные от вирусов растения .
Читал, что некоторые недобросовестные лаборатории занимаются чисто размножением, а вирусы как были в исходном растении так и остаются в полученных саженцах. 
некоторые недобросовестные лаборатории занимаются чисто размножением, а вирусы как были в исходном растении так и остаются в полученных саженцах
Вполне может быть. Я спрашивал технологов и вот, что услышал: Вирус — уникальный живой объект, который не может размножаться сам по-себе. Он представляет собой молекулу, являющуюся почти голым генетическим кодом. Эта молекула внедряется в живую клетку и заменяет ее генетический код на свой, либо трансформирует ее код своим. После этого клетка растения уже не клетка своего растения — она чужая внутри, а внешне похожа на соседние, поэтому живой организм с ней не борется, как с чужеродной. Получается, чтоб убить вирус в организме — нужно убить измененную клетку, а она по своим жизненным функциям очень похожа на здоровые клетки этого организма. Как отличить при уничтожении. Замечу, что убить вирус внутри клетки просто невозможно. Способы уничтожения зараженных клеток есть, но они очень дороги и несовершенны — страдает весь организм. Поэтому в меристемных лабораториях нашли другой подход. Он основывается на том, что часто так бывает, что у растения заражены не все клетки. Обычно вирус не успевает заражать верхушечные клетки конуса роста — меристемы. Берут верхний кусочек точки роста, помещают на питательную среду и выращивают растеньице. Затем у него берут верхний кусочек точки роста, помещают на питательную среду и опять выращивают растеньице. Так делают несколько раз. Затем, чтобы убедиться, что удалось «оторваться» от вируса растение тестируют на наличие вирусов. Делается это при помощи специальных биологических маркеров и несколько раз, так как нужен надежный ответ. Если вирус не обнаружен, растение начинают размножать in vitro. Если обнаружен — вся канитель начинается сначала. Иными словами: с вирусом не борются, не пытаются убить, а пытаются от него уйти. Потом проверяются, удалось, или нет.
Понятно, что в цепочке таких действий может появиться сбой или даже желание что-то недоделать. От этого удерживает их чистый коммерческий расчет. Промышленные плантации постепенно заражаюся всякой дрянью, урожаи начинают падать — приходит время обновлять посадки. И фермер опять обращается в ту же лабораторию за новой партией. Он же не пойдет туда, где ему подсунули некачественный товар.
Источник
Размножение растений in vitro в домашних условиях
Для хорошего результата нужно учитывать все правила процедуры. Это увеличивает затраты и выгода будет, только если размножать в достаточно больших количествах. При размножении путем in vitro посадочный материал выходит достаточно качественный.
Растения лучше адаптируются и быстро развиваются. Имеют сильный иммунитет к заболеваниям.
Начинать клонирование нужно с полной стерилизации как среды, растительного материала, инструментов. Помещение моется дезинфицированными средствами. Желательно чтоб стены были обложены кафелем, что облегчает процедуру. Несколько часов обрабатывается комната кварцевой лампой. Приобретается медицинский комплект в виде халата, шапочки и марлевой повязки. Спецодежда обрабатывается горячим утюгом и кварцуется в той же комнате. Все необходимые инструменты разлаживаются в комнате в момент кварцевания. В обязательном порядке заклеиваются все отверстия, включая вентиляционные. Любая бактерия или микроб попавшая на растение загубит всю операцию.
Вам понадобятся инструмент для разрезания, его лезвие должно быть очень острым и тонким. Чистые емкости и льняные тряпочки, завернутые в фольгу, стерилизуются 1-2 часа при высокой температуре не ниже 200 С, в духовке. Таким же образом стерилизуете дистиллированную воду.
Теперь необходимо обработать растительный материал. Промывается под проточной водой с хозяйственным мылом.
Разводится на 100 мл воды 10 гр. хлорки, это будет дезинфицирующий раствор.
Начинаете работать в комнате с включенной кварцевой лампой. Там же и переодеваетесь в спец одежду. Затем обрабатываете руки и рабочее место спиртом.
На стол ставите три банки со стерильной водой и одну с хлор раствором.
Растительный материал окунаете в раствор. Пинцетом вынимаете один фрагмент через 5 минут, второй через 8, третий через 20 минут. Пинцет после каждого применения накаливайте на огне. Опускаете фрагмент растения в банку с водой на 10 минут. Затем в последующие, для удаления остатков хлора.
На тряпку предварительно обработанную ложится растительный материал. Острым, тонким предметом (скальпель) обожженным над огнем отрезается почка. Под почкой оставляется 5 мм, нал 3 мм. Берете пробирку со специальной смесью и помещаете туда почку. Пробирка герметично закрывается фольгой. Такую операцию проделываете с остальными фрагментами. Не забывайте менять тряпочки и обжигать инструменты после каждого применения.
Теперь пробирки хранятся на полке. Соблюдается 16 часовой световой режим, высокая 70 % влажность. Температура достаточно высокая – 24-28оС. Важно не убить стерилизацией растительный материал, но при этом уничтожить вредоносные бактерии и микробы. В случае правильно проведенной процедуры через месяц появятся крошечные росточки.
Процесс in vitro достаточно щепетилен и требует больших затрат физических ресурсов. Малейший недочет и вся операция будет проведена безуспешно.
Источник